خىمىيىلىك سانائەت خىمىيىلىك تەركىبلىرى ئۈچۈن ASTM A790 2507/2205 1.4462 / 1.4410 دوپپا كەپشەرلەنگەن تۇرۇبا ، SPECC1L كەمچىل بولسا ، بوغۇملارنىڭ مۇقىملىقىنى ئاشۇرۇپ ، باش سۆڭەك نېرۋا ھۈجەيرىلىرىنىڭ تۆكۈلۈشىنى ئازايتىدۇ.

Nature.com نى زىيارەت قىلغىنىڭىزغا رەھمەت.سىز چەكلىك CSS قوللىشى بىلەن توركۆرگۈ نۇسخىسىنى ئىشلىتىۋاتىسىز.ئەڭ ياخشى تەجرىبە ئۈچۈن يېڭىلانغان تور كۆرگۈچنى ئىشلىتىشىڭىزنى تەۋسىيە قىلىمىز (ياكى Internet Explorer دىكى ماسلىشىشچان ھالەتنى چەكلەڭ).ئۇنىڭدىن باشقا ، داۋاملىق قوللاشقا كاپالەتلىك قىلىش ئۈچۈن ، ئۇسلۇب ۋە JavaScript بولمىغان تور بېكەتنى كۆرسىتىمىز.

ASTM A790 2507/2205 1.4462 / 1.4410 خىمىيىلىك سانائىتى ئۈچۈن دوپپا كەپشەرلەنگەن تۇرۇبا

لياۋچېڭ سىخې SS ماتېرىيال چەكلىك شىركىتى.داتلاشماس پولات يوچۇقسىز تۇرۇبا ، يورۇق تۇتاشتۇرۇلغان تۇرۇبا ، يوچۇقسىز يوتقان تۇرۇبا قاتارلىقلار بىلەن شۇغۇللىنىدىغان باشلامچى ئىشلەپچىقارغۇچى.خېرىدارلارغا قۇلايلىق بولسۇن ئۈچۈن ، تۇرۇبا ۋە تۇرۇبا يولىنىمۇ كەپشەرلىدۇق.لياۋچېڭ سىخې SS ماتېرىيال چەكلىك شىركىتى.ئەڭ ئىلغار ئىشلەپچىقىرىش ۋە سىناق ئۈسكۈنىلىرى بار.تەلىپىڭىزنى پۈتۈنلەي قاندۇرالايمىز.ئۆلچەمگە ئاساسەن ، بىز ئىشلەپچىقارغان تۇرۇبىلار ھەمىشە توغرا OD ۋە WT بەرداشلىق بېرىش ئىقتىدارىغا ئىگە.كەڭ قورساقلىقنى كونترول قىلىش ئۆلچەم ھاسىل قىلىشقا قاتتىق ماس كېلىدۇ.مەھسۇلاتلىرىمىز ھەمىشە خېرىدارلاردىن رازى.خېرىدارلار مەھسۇلاتلىرىمىزنى سېتىۋېلىپ تېخىمۇ كۆپ پايدا ياراتتى.
a) OD (تاشقى دىئامېتىرى): 3.18 مىللىمېتىردىن 101.6 مىللىمېتىرغىچە
b) WT (تام قېلىنلىقى): 0.5 مىللىمېتىردىن 20 مىللىمېتىرغىچە
c) ئۇزۇنلۇقى: خېرىدارلارنىڭ تەلىپىگە ئاساسەن
d) ئۆلچەم: ASTM A312;ASTM A269;ASTM A789;ASTM A790 قاتارلىقلار
e) جەريان ئۇسۇلى: ERW ، EFW قاتارلىقلار

تام تەسۋىردە ھەر بىر تام تەسۋىردە ئۈچ ماقالە كۆرسىتىلىدۇ.كەينى ۋە كېيىنكى كۇنۇپكىلارنى ئىشلىتىپ تام تەسۋىردىن يۆتكىڭ ياكى ئاخىرىدا تام تەسۋىر كونترول كۇنۇپكىسى ئارقىلىق ھەر بىر تام تەسۋىردىن ئۆتۈڭ.
باش سۆڭەك نېرۋا ھۈجەيرىسى (CNCC) تۆرەلمە نېرۋا قاتلىمىنى سويۇپ ، يۇتقۇنچاق ئېغىزىغا كۆچۈپ كېلىدۇ ، بۇ ئوتتۇرا تۈزۈلۈشنىڭ كۆپ قىسمىنى تەشكىل قىلىدۇ.CNCC نىڭ نورمالسىزلىقى كۆپ ئۇچرايدىغان تۇغما خاراكتېرلىك كەمتۈكلۈك كېسىلىنىڭ پەيدا بولۇشىدا مۇھىم رول ئوينايدۇ.تىپىك بولمىغان ۋە ئۇنىۋېرسال كېسەللىكى بار بىمارلاردا Heterozygous SPECC1L نىڭ ئۆزگىرىشى بايقالغان.بۇ يەردە ، مەدەنىيەتلىك SPECC1L سوقۇلۇش ھۈجەيرىسىدىكى كانون يېپىشتۇرۇش ئۇلىنىشى (AJ) زاپچاسلىرى ، cat كاتېنېن ۋە E- كادىرىننىڭ داغلانغانلىقىنى دوكلات قىلىمىز ، ئېلېكترونلۇق مىكروگرافىدا AJ نىڭ ئاپپاق ئاساسى تارقىلىشى كۆرسىتىلدى.SPECC1L نىڭ مېڭە قان تومۇر كېسەللىكىدىكى رولىنى چۈشىنىش ئۈچۈن ، بىز Specc1l كەمتۈك مائۇس مودېلىنى قۇردۇق.ھەمجىنىس ئۆزگىرىشچان تۆرەلمە ئەجەللىك بولۇپ ، نېرۋا نەيچىسى تاقاش ۋە CNCC لامپىسى بۇزۇلغان.ئۆزگىرىشچان نېرۋا قاتلىمىدا AJ ئاقسىلى داغ كۆپىيىدۇ.بۇ AJ كەمتۈكلىكى CNCC ئايرىشتىكى كەمتۈكلۈك بىلەن بىردەك بولۇپ ، AJ تارقىتىشىنى تەلەپ قىلىدۇ.ئۇنىڭدىن باشقا ، Specc11 ئۆزگەرتكۈچى PI3K-AKT سىگنالىنى ئازايتىپ ، ئاپتوماتىك داۋالاشنى كۈچەيتتى.ۋىرۇستا ، ياۋا تىپتىكى ھۈجەيرىلەردە PI3K-AKT سىگىنالىنىڭ يېنىك دەرىجىدە چەكلىنىشى AJ ئۆزگىرىشىنى قوزغىتىشقا يېتەرلىك ئىدى.مۇھىمى ، PI3K-AKT يولىنى قوزغىتىش ئارقىلىق SPECC1L سوقۇلۇشتىن كېلىپ چىققان AJ ئۆزگىرىشلىرىنى ئۆزگەرتكىلى بولىدۇ.ئومۇملاشتۇرغاندا ، بۇ سانلىق مەلۇماتلار SPECC1L نىڭ PI3K-AKT سىگنالى ۋە AJ بىئولوگىيىسىنىڭ رومان تەڭشىگۈچىسى بولۇش سۈپىتى بىلەن نېرۋا نەيچىسىنى تاقاش ۋە CNCC قاتلىمىغا ئېھتىياجلىق ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
باش سۆڭەك نېرۋا ھۈجەيرىلىرى (CNCCs) ئېفتېلىيە خاراكتېرلىك مېڭە قان تومۇر ئۆسمىسى (EMT) گە مۇناسىۋەتلىك جەريان ئارقىلىق تەرەققىي قىلىۋاتقان نېرۋا قاتلىمىنىڭ نېرۋا ھۈجەيرىسىدىن ئايرىلىدۇ.تارقىلىشچان ئېپىتېلىيە خاراكتېرلىك CNCC لار ھۈجەيرىلەر ئارا تۇتاشتۇرۇشنى قالايمىقانلاشتۇرۇپ ، بىرىنچى ۋە ئىككىنچى يۇتقۇنچاق ئەگمىسىنى تولدۇرىدىغان ۋە كۆكرەك پەردىسىنىڭ كۆپ قىسمىنى شەكىللەندۈرىدىغان يۆتكىلىشچان مېڭە قان تومۇرغا ئايلىنىدۇ.شۇڭا ، CNCC ئىقتىدارىنى تەڭشەيدىغان گېن كۆپىنچە كۆكرەك پەردىسى قاتارلىق كۆكرەك پەردىسىنىڭ تۇغما نورمالسىزلىقىنىڭ كېسەللىك سەۋەبىدە قالايمىقانلىشىدۇ ، كۆپىنچە ئامېرىكىدىلا تۇغۇلغانلارنىڭ 1/800 ىگە تەسىر كۆرسىتىدۇ.تۇغما كەمتۈكلۈكنىڭ بىرى.
CNCC نىڭ يوقىتىلىشى چاشقانلاردىكى تۆرەلمىنىڭ يېتىلىشى 8.5 كۈندىن 9.5 كۈنگىچە بولغان ئالدى نېرۋا نەيچىسىنىڭ تاقىلىشى بىلەن توغرا كېلىدۇ.بىر قاتار چاشقان ئورفاكسىمان يېرىلىشقا مۇناسىۋەتلىك گېننىڭ ئۆزگىرىشى يەنە بىر قىسىم نېرۋا نەيچىسى كەمتۈكلىكىنى كۆرسىتىدۇ ، مەسىلەن Irf69,10 ، Ghrl310 ، Cfl111 ۋە Pdgfrα12.قانداقلا بولمىسۇن ، نېرۋا نەيچىسىنى تاقاش ۋە CNCC قاتلاملىرىنى ئايرىش جەريانىنى مۇستەقىل دەپ قاراشقا بولىدۇ ، چۈنكى Splotch ئۆزگىرىشچان چاشقان (Pax3) CNCC نىڭ قاتلاملىشىشى ياكى كۆچۈشىگە ھېچقانداق تەسىر كۆرسەتمەي نېرۋا نەيچىسى تاقاشتىكى كەمتۈكلۈكلەرنى كۆرسىتىدۇ.CNCC پارچىلىنىش ۋە نېرۋا نەيچىسى تاقاشتا كەمتۈك بولغان قوشۇمچە مائۇس مودېللىرى بۇ ئىككى جەرياننىڭ ئورتاق مولېكۇلا ئاساسىنى ئېنىقلاشقا ياردەم بېرىدۇ.
CNCC نىڭ نېرۋا ھۈجەيرىسىدىن ئايرىلىشى يېپىشقاق ئۇلىنىشنى (AJ) ئېرىتىشنى تەلەپ قىلىدۇ ، بۇلار ئاقسىل قەۋىتىدىن تەركىب تاپقان بولۇپ ، تەركىبىدە E- كادىرىن ، cat كاتېنېن ، α-E- كاتېنېن ۋە α- ئاتىنتىن قاتارلىقلار بار. ھەددىدىن زىيادە بېسىم قىلىش نېرۋا قاتلىمىدىكى E- كادىرىننىڭ CNCC نىڭ ئايرىش نىسبىتىنىڭ تۆۋەنلىگەنلىكى ياكى كېچىكتۈرۈلگەنلىكىنى كۆرسىتىپ بەردى.ئەكسىچە ، E- كادىرىننى بېسىش بالدۇر قاتلامغا ئايلىنىدۇ.CNCC قاتلىمىدا EMT نى ۋاسىتە قىلىدىغان نۇرغۇن ئامىللار ترانسكرىپسىيە ئامىلى (AP2α, Id2, FOXD3, SNAIL, TWIST, SOX10) ۋە ماترىسسا مېتاللوپروتىنازا (MMPs) قاتارلىق تاشقى ھۈجەيرە ماترىسسا (ECM) قايتا ھاسىل بولىدىغان ئاقسىل ، ئەمما CNCC لار بىۋاسىتە سىتوسېلكېل AJ تەڭشىگۈچ. تېخى نامەلۇم.PI3K-AKT يولى E- كادىرىننىڭ سەۋىيىسىگە قارشى تۇرىدىغانلىقى مەلۇم ، ئاساسلىقى راك تەتقىقاتىدىن.يېقىنقى تەتقىقاتلار شۇنى ئىسپاتلىدىكى ، PDGFα نى ئاساس قىلغان PI3K-AKT سىگنالىنىڭ يوقىلىشى چاشقانلاردا دانىخورەك نورمالسىزلىقىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ ، بۇنىڭ ئىچىدە ئېغىز بوشلۇقى ۋە نېرۋا نەيچىسى كەمتۈكلىكى بار.قانداقلا بولمىسۇن ، PI3K-AKT يولى بىلەن CNCC قاتلىمىدىكى AJ مۇقىملىقى ئوتتۇرىسىدىكى مۇناسىۋەت ئېنىق ئەمەس.
بىز ئىلگىرى SPECC1L نى ئېغىزدىن كۆزگە سوزۇلغان ئېغىر يېرىقلىق ئىككى ئادەمدىكى تۇنجى ئۆزگىرىشچان گېن دەپ بېكىتتۇق ، بۇ يانتۇ يېرىق (ObFC) ياكى Tessier IV18 يېرىلىش دەپ ئاتىلىدۇ.SPECC1L نىڭ ئۆزگىرىشى ئۆزلۈكىدىن ھۆكۈمرانلىق قىلىدىغان Opitz G / BBB ئۇنىۋېرسال كېسەللىكى (OMIM # 145410) دىن ئىبارەت كۆپ ئەۋلادلىق ئائىلىدە ئېنىقلانغان بولۇپ ، بۇنىڭدا تەسىرگە ئۇچرىغان كىشىلەر يۇقىرى قان بېسىمى ۋە كالپۇك يېرىلىپ كەتكەن ، ھەمدە بىر ئائىلىدە تىبى ھەددىدىن زىيادە كۆپ بولۇش ئۇنىۋېرسال كېسەللىكى (OMIM # 145420) 20 .Opitz G / BBB ئۇنىۋېرسال كېسەللىكىنىڭ يېرىمىدىن كۆپرەكى X ئۇلانغان (OMIM # 300000) بولۇپ ، MID1 گېنىدىكى ئۆزگىرىشتىن كېلىپ چىققان ، بۇ مىكروبوبىلغا مۇناسىۋەتلىك ھۈجەيرە ئىسكىلىتىنىڭ 22 ئاقسىلنى كودلاشتۇرىدۇ.بىز قىياس قىلىمىزكى ، SPECC1L يەنە مىكرو قۇتۇب ۋە ئاتىن سىتوسكېلېتون بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئاقسىل ، ھۈجەيرە يېپىشتۇرۇش ۋە كۆچۈش جەريانىدا ئاتىن سىتوسكېلېتوننى ئۆزگەرتىشكە ئېھتىياجلىق سىگنالنى ۋاسىتە قىلالايدۇ.In vitro ۋە vivo تەتقىقاتى ئارقىلىق ، بىز ھازىر SPECC1L نى PI3K-AKT سىگنالى ئارقىلىق AJ مۇقىملىقىنىڭ يېڭى تەڭشىگۈچىسى دەپ تەسۋىرلەيمىز.ھۈجەيرە سەۋىيىسىدە ، SPECC1L كەملىك Pan-AKT ئاقسىلىنىڭ سەۋىيىسىنىڭ تۆۋەنلىشىنى ۋە AKT يولىنىڭ خىمىيىلىك قوزغىتىلىشى بىلەن يوقىتىلغان AJ نىڭ ئاپپاق ئاساسى تارقىلىشىنىڭ ئېشىشىنى كەلتۈرۈپ چىقاردى.Vivo دا ، Specc11 كەمتۈك تۆرەلمە نېرۋا نەيچىسىنىڭ تاقىلىپ قالغانلىقىنى كۆرسىتىپ ، CNCC نىڭ ئاجرىلىپ چىقىشىنى ئازايتقان.شۇڭا ، SPECC1L چىراي مورفوگېنسىيىسى جەريانىدا نورمال CNCC ئىقتىدارىغا ئېھتىياجلىق يۇقىرى دەرىجىدە تەڭشەلگەن ھۈجەيرە يېپىشتۇرۇش سىگنالىدا خىزمەت قىلىدۇ.
SPECC1L نىڭ ھۈجەيرە سەۋىيىسىدىكى رولىنى ئايدىڭلاشتۇرۇش ئۈچۈن ، بىز ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەن مۇقىم سۆڭەك شالاڭ ھۈجەيرە لىنىيىسى U2OS نى SPECC1L18 كە ئىشلەتتۇق.SPECC1L (kd) سوقۇلغان بۇ تۇراقلىق U2OS ھۈجەيرىلىرى SPECC1L خاتىرىلەش ۋە ئاقسىلنىڭ سەۋىيىسىدە ئوتتۇراھال (% 60-% 70) تۆۋەنلىگەن ، ئاتىن سىتوسكېلېتوننىڭ كۆچۈشى ۋە قايتا تەشكىللىنىشىدىكى كەمتۈكلۈكلەر بىلەن سېلىشتۇرغاندا ، بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا ، ئۆتكۈنچى مەزگىلدە ئېغىر دەرىجىدە تۆۋەنلەش بولغان. SPECC1L نىڭ 23 خىل كەمتۈكلۈكنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغانلىقى كۆرسىتىلدى.يەنىمۇ ئىلگىرىلىگەن ھالدا ئېنىقلاش ئارقىلىق ، بىزنىڭ مۇقىم بولغان SPECC1L-kd ھۈجەيرىلىرىمىزنىڭ مورفولوگىيەنى ئىنتايىن يۇقىرى دەرىجىدە بىرلەشتۈرگەنلىكىنى بايقىدۇق (1-رەسىم).تۆۋەن تۇتاشتۇرۇشتىكى يەككە كونترول ھۈجەيرىلىرى ۋە kd ھۈجەيرىلىرى ئوخشىشىپ كېتەتتى (1A ، D رەسىم).بىرىكىپ 24 سائەتتىن كېيىن ، كونترول ھۈجەيرىلىرى كۇبلوئىد شەكلىنى ساقلاپ قالدى (رەسىم 1B ، E) ، SPECC1L-kd ھۈجەيرىلىرى ئۇزىراپ كەتتى (رەسىم 1C ، F).ھۈجەيرە شەكلىدىكى بۇ ئۆزگىرىشنىڭ دائىرىسى vivo نەق مەيدان كونترول ھۈجەيرىسى ۋە kd ھۈجەيرىسىنى سۈرەتكە تارتقان (1-كىنو).SPECC1L نىڭ تۇتاشقان ھۈجەيرىلەردە ئوينايدىغان رولىنى ئېنىقلاش ئۈچۈن ، بىز ئالدى بىلەن ئۇنىڭ ئىپادىسىنى تەكشۈردۇق.بىز SPECC1L ئاقسىلنىڭ بىرىكتۈرۈلگەندىن كېيىن يۇقىرى كۆتۈرۈلگەنلىكىنى بايقىدۇق (1G رەسىم) ، ئەمما SPECC1L خاتىرىلەش دەرىجىسى ئۆسمىدى (1H رەسىم).بۇنىڭدىن باشقا ، ھۈجەيرىلەرنىڭ زىچلىقىنىڭ ئېشىشىغا ئەگىشىپ ، SPECC1L ئاقسىلى ھۈجەيرىلەر ئارا چېگرالاردا يىغىلىپ قالدى (رەسىم 2A-E) ، ئەندىزە پەردىسىگە مۇناسىۋەتلىك cat كاتېنېن بىلەن قاپلانغان (2A'-E 'رەسىم).SPECC1L نىڭ ئاتىن سىتوسكېلېتون 18،23 بىلەن بولغان باغلىنىشىنى كۆزدە تۇتۇپ ، بىز SPECC1L نىڭ ئاتىننى ئاساس قىلغان يېپىشتۇرۇش ئېغىزى (AJ) بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر قىلىدىغانلىقىنى پەرەز قىلدۇق.
(AF) SPECC1L سوقۇلۇش (DF) ھۈجەيرىلىرى U2OS ھۈجەيرىسىنى كونترول قىلىش (AC) غا سېلىشتۇرغاندا يۇقىرى ئۇلىنىش (F) دا ئۇزىراپ كېتىدۇ.بۇ يەردە كۆرسىتىلگىنى بىز ئوخشىمىغان ھۈجەيرە زىچلىقى ئۈچۈن تاللىغان ئالتە ۋاقىت نۇقتىسىنىڭ ئۈچى (T1, T3, T6).(G) غەربنىڭ blot تەھلىلىدە كۆرسىتىلىشچە ، SPECC1L ئاقسىلى كونترول ھۈجەيرىلىرىدىكى تۆۋەن دەرىجىدىكى تۇتاشتۇرۇشقا سېلىشتۇرغاندا ، يۇقىرى دەرىجىدە تۇتاشقان ھالەتتە مۇقىملاشقان.SPECC1L نىڭ غەرب توپى مۆلچەردىكى 120 kDa بەلۋاغ ۋە تېخىمۇ يۇقىرى مولېكۇلا ئېغىرلىق بەلبېغىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ ، تەرجىمە قىلىنغاندىن كېيىن ئۆزگەرتىلگەن بولۇشى مۇمكىن (*).غەربنىڭ blot تەھلىلى تۆۋەن ۋە يۇقىرى تۇتاشتۇرۇش ئۈچۈن ئوخشاش شارائىتتا ئېلىپ بېرىلدى.SPECC1L نىڭ تۆۋەن ۋە يۇقىرى تۇتاشقانلىقىنى كۆرسىتىدىغان رەسىملەر ئوخشاش بىر رەسىمدىن تارتىلغان.ئوخشاش بىر بۆلەك ئېلىۋېتىلدى ۋە act- ئاتىن ئانتىتېلاسى بىلەن قايتا تەكشۈرۈلدى.(H) مىقدار RT-PCR ئانالىزىدا SPECC1L خاتىرىلەش سەۋىيىسىدە كۆرۈنەرلىك ئۆزگىرىش بولمىغانلىقى كۆرسىتىلدى.خاتالىق بالدىقى تۆت مۇستەقىل تەجرىبىنىڭ SEM لىرىغا ۋەكىللىك قىلىدۇ.
(AE) بىز ھۈجەيرە شەكلىنى ئانالىز قىلىش ۋە SPECC1L سوقۇلۇش (kd) بىلەن U2OS ھۈجەيرىسىدىكى AJ ئۆزگىرىشىنى نورماللاشتۇرۇش ئۈچۈن بىر قاتار ھۈجەيرىلەرنىڭ زىچلىقىغا ۋەكىللىك قىلىدىغان ئالتە ۋاقىت نۇقتىسىنى (T1-T6) تاللىدۇق.بۇ ۋاقىت نۇقتىلىرىنىڭ ئالدىنقى بەشى يەككە ھۈجەيرە (T1) ، كىچىك ھۈجەيرە توپىنىڭ (T2)% 50-% 70 بىرىكىشى ، kd ھۈجەيرىسىنى (T3) ئۆزگەرتمەي بىرىكتۈرۈش ، kd ھۈجەيرىسىنى (T4) قايتا تەشكىللەش ۋە 24 سائەتلىك ئۆزگىرىشنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.kd (T5) ھۈجەيرىسىنىڭ ئارقا شەكلىدە.SPECC1L ئاقسىلى ئاساسلىقى T1 (A) دىكى سىپوپلازمىدا تارقالغان ، ئەمما ئۇنىڭ يىغىلىشى كېيىنكى ۋاقىت نۇقتىلىرىدا ھۈجەيرە ئارىلىقىدا بايقالغان (B - E ، ئوق).(FJ) cat- كاتېنېن AJ مۇرەككەپلىكى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ھۈجەيرە ئارىلىقىدا مۇشۇنىڭغا ئوخشاش يىغىلىشنى كۆرسىتىدۇ.(A'-E). ئۆزگەردى.Bars = 10 µm.
ئاندىن بىز SPECC1L كەملىكنىڭ AJ غا بولغان تەسىرىنى ئېنىقلاشقا تىرىشتۇق.بىز AJ غا مۇناسىۋەتلىك بىر قانچە بەلگە ئىشلەتتۇق ، بۇنىڭ ئىچىدە F-actin ، myosin IIb ، β- كاتېنېن ۋە E- كادىرىن 24،25،26،27 قاتارلىقلار بار.SPECC1L-kd ھۈجەيرىسىدە ئاتىن بېسىم تالالىرى ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەندەك كۆپەيدى (3A ، B) 18.ئاتىن فىلمېنتى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولغان مىئوسىن IIb ۋىرۇستا SPECC1L-kd ھۈجەيرىسىنىڭ مۇشۇنىڭغا ئوخشاش ئۆسكەنلىكىنى كۆرسەتتى (3C ، D).AJ بىلەن مۇناسىۋەتلىك β- كاتېنېن ھۈجەيرە پەردىسىدىكى كادېرىن بىلەن باغلىنىپ ، كونترول كۇبسىتتا نورمال «ھەسەل» ئىپادىلەش ئەندىزىسىنى كۆرسىتىدۇ (3E ، G رەسىم).قىزىقارلىق يېرى شۇكى ، بىرىكمە مىكروسكوپ ئارقىلىق تەكشى رەسىملەردە ، β- كاتېنېن (3E ، F) ۋە E- كادىرىن (3G رەسىم ، H) تۇتاشتۇرۇلغان SPECC1L كەمتۈك ھۈجەيرىسىنىڭ ھۈجەيرە پەردىسىگە داغ چۈشكەن بولۇپ ، كېڭەيتىلگەن داغنىڭ كۆرۈنەرلىك ئەندىزىسىنى كۆرسىتىپ بەرگەن.Kd ھۈجەيرىسىدە داغلانغان AJ بىلەن مۇناسىۋەتلىك cat كاتېنېننىڭ بۇ كېڭىيىشى ئەڭ تۇتاشقان ۋاقىتتا كۆرۈنەرلىك بولغان ، ئەمما ھۈجەيرە شەكلىنىڭ ئۆزگىرىشىدىن ئىلگىرى كۆرۈلگەن (2F-J ، F'-J ').بۇ كېڭەيتىلگەن AJ داغنىڭ فىزىكىلىق ماھىيىتىنى ئېنىقلاش ئۈچۈن ، بىز ئېلېكترونلۇق مىكروسكوپ (TEM) ئارقىلىق SPECC1L-kd U2OS ھۈجەيرىسىنىڭ ئوپتىكىلىق ئاساسى يۈزىدىكى ھۈجەيرە چېگرىسىنى تەكشۈردۇق (3I ، J).AJ (ئوقيا) نى كۆرسىتىدىغان ئېلېكترون زىچ رايونلىرى بولغان كونترول ھۈجەيرىلىرىگە سېلىشتۇرغاندا (3I رەسىم) ، kd ھۈجەيرىلىرى (3J رەسىم) چوڭ ، تۇتاش رايونلارنىڭ ئېلېكترون زىچلىقى يۇقىرى رايونلارنى كۆرسىتىپ بەردى..ئۇنىڭدىن باشقا ، تەتۈر بۆلەكلەردە ، بىز kd ھۈجەيرىسىدە كەڭ ھۈجەيرە پەردىسىنىڭ قاتلىنىشىنى كۆردۇق (رەسىم S1A, B) ، بۇ β كاتېنېن ۋە E- كادىرىن داغلاش بەلبېغىنىڭ كېڭەيتىلگەن ئەندىزىسىنى چۈشەندۈرۈپ بېرىدۇ (3F ، H).SPECC1L نىڭ AJs دىكى رولىنى قوللاش ئۈچۈن ، cat- كاتېنېن SPECC1L بىلەن بىرىكتۈرۈلگەن U2OS ھۈجەيرىسىنىڭ لىماتلىرىدا ئورتاق ئىممۇنىتېتلانغان (3K رەسىم).AJ بەلگىسىگە قارىتا ئىممۇنىتېتنى كېڭەيتىش بىلەن بىللە ، TEM ئانالىزى بىزنىڭ SPECC1L كەملىكنىڭ AJ ئاپپاق ئاساسى زىچلىقى ۋە ئوخشىماسلىقىنى ئاشۇرىدىغانلىقى توغرىسىدىكى پەرىزىمىز بىلەن بىردەك بولدى.
.F-actin (C, D) بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولغان مىئوسىن IIb نىڭ داغلىنىشى.SPECC1L-kd (F, H) ھۈجەيرىلىرىدە كونترول كاتەكچىسى (E, G) دا داغلانغان β- كاتېنېن ۋە E- كادىرىن پەردىسىنىڭ سىلىق ئەندىزىسى كۈچەيتىلدى.Bars = 10 µm..كونترول ھۈجەيرىسى يېپىشقاق ئۇلىنىش (I ، ئوق) نى كۆرسىتىپ بېرىدىغان ئالاھىدە ئېلېكترونلۇق زىچ رايونلارنى كۆرسىتىدۇ.بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا ، SPECC1L-kd ھۈجەيرىسىدىكى پۈتكۈل ئوپتىكىلىق ئاساسىي ئۇلىنىش ئېلېكترون زىچلىقى (J ، ئوق) پەيدا بولۇپ ، يېپىشقاق ئۇلىنىشنىڭ زىچلىقى ۋە تارقىلىشىنى كۆرسىتىدۇ..تۆت مۇستەقىل تەجرىبىنىڭ بىرىگە ۋەكىللىك قىلىدىغان بىر جايدىن تارتىلغان رەسىم.
SPECC1L نىڭ مېڭە قان تومۇر كېسەللىكىدىكى رولىنى چۈشىنىش ئۈچۈن ، بىز DTM096 ۋە RRH048 (BayGenomics, CA) دىن ئىبارەت ئىككى مۇستەقىل ES توزاق ھۈجەيرىسىدىن پايدىلىنىپ ، Specc1l كەمتۈك مائۇس مودېلىنى قۇردۇق ، بۇلار ئىچكى قىسىم 1 ۋە Specc1l خاتىرىسىنى 15 دە قولغا چۈشۈردى (1-رەسىم). .4A ، رەسىم S2).ئالدامچىلىق ۋېكتور قىستۇرمىسىنىڭ گېن ئورنى پۈتكۈل گېن تەرتىپى تەرىپىدىن بەلگىلىنىپ PCR تەرىپىدىن دەلىللەندى (S2 رەسىم).ھەر ئىككى گېن تۇزاق لايىھىسى تۇتۇلغاندىن كېيىن Specc11-lacZ مۇخبىرلىرىنىڭ رامكا ئىچىدە بىرىكىشىگە يول قويدى.شۇڭلاشقا ، X-gal داغ ئارقىلىق بېكىتىلگەن lacZ ئىپادىسى Specc11 ئىپادىسىنىڭ كۆرسەتكۈچىسى سۈپىتىدە ئىشلىتىلگەن.ھەر ئىككى ئاللېس ئوخشىشىپ كېتىدىغان lacZ ئىپادىلەش ئەندىزىسىنى كۆرسەتتى ، 1-بۆلەكتىكى DTM096 گېن تۇزىقى 15-نومۇرلۇق RRH048 دىن كۈچلۈك ئىپادىسىنى كۆرسەتتى (كۆرسىتىلمىدى).قانداقلا بولمىسۇن ، Specc1l كەڭ كۆلەمدە ئىپادىلەنگەن بولۇپ ، E8.5 دىكى نېرۋا قاتلىمىدا (4B رەسىم) ، E9.5 ۋە E10.5 دىكى نېرۋا نەيچىسى ۋە يۈز جەريانلىرىدا (4C رەسىم ، D) ۋە پۇت-قول تەرەققىي قىلىشتا ئالاھىدە كۈچلۈك ئىپادىلىنىدۇ. at E10.5 ۋە كۆز (4D رەسىم).بىز ئىلگىرى E10.5 دىكى بىرىنچى يۇتقۇنچاق ئېغىزىدىكى SPECC1L ئىپادىسىنىڭ ئېپىتېلىيە ۋە ئاستىدىكى mesenchyme18 دە بارلىقى ، CNCC نەسەبى بىلەن بىردەك ئىكەنلىكىنى خەۋەر قىلغان ئىدۇق.CNCC دىكى SPECC1L ئىپادىسىنى سىناش ئۈچۈن ، بىز E8.5 نېرۋا قاتلىمى (4E-J رەسىم) ۋە E9.5 باش سۆڭەك بۆلەكلىرىنى ئورۇنلىدۇق (4K- رەسىم).E8.5 دە ، SPECC1L نېرۋا قاتلىمىغا كۈچلۈك داغ چۈشتى (رەسىم 4E ، H) ، بۇنىڭ ئىچىدە NCC بەلگىسى چۈشۈرۈلگەن ھۈجەيرىلەر بار (رەسىم 4G ، J).E9.5 دە ، SPECC1L (رەسىم 4K ، N) كۈچلۈك كۆچۈرۈلگەن CNCC غا AP2A (رەسىم 4L ، M) ياكى SOX10 (4O رەسىم ، 4O).
(A) مائۇس Specc11 گېنىنىڭ سىخېمالىق ئىپادىلىنىشى ES DTM096 (intron 1) ۋە RRH048 (intron 15) ھۈجەيرە كلونلىرىغا ئالدامچىلىق ۋېكتور قىستۇرۇلغانلىقىنى كۆرسىتىدۇ..NE = نېرۋا ئاجىزلىقى ، NF = نېرۋا قاتلىمى ، PA1 = بىرىنچى يۇتقۇنچاق ئەگمىسى.(EP) SPECC1L NCC بەلگىسى AP2A ۋە SOX10 بىلەن E8.5 (NF; EJ) نېرۋا قاتلىمى ۋە E9.5 (KP) باش سۆڭەك بۆلۈمىدە ئىممۇنىتېتلاش.SPECC1L داغ E8.5 (E, H; ئوقيا) نېرۋا قاتلىمىدا كەڭ كۆلەمدە كۆزىتىلدى ، بۇنىڭ ئىچىدە AP2A (F, G; ئوقيا) ۋە SOX10 (I, J; ئوقيا) دەپ يېزىلغان ھۈجەيرىلەر بار.E9.5 دە ، SPECC1L AP2A (L, M; ئوق) ۋە SOX10 (O, P; يا ئوق) دەپ يېزىلغان CNCCs (K, N; ئوق) كۈچلۈك داغلاندى.
گېروزوگېزلىق Specc1lDTM096 / + ۋە Specc1lRRH048 / + چاشقانلار ئارا كېسىشىش ئارقىلىق بۇ ئىككى گېن تۇز توپىنىڭ بىر-بىرىنى تولۇقلىمايدىغانلىقىنى ، گېن قاپقان ئاللېنىڭ بىرىكمە گېروزوگېگوت ۋە تۆرەلمە گوموزىگوتنىڭ تۆرەلمە خاراكتېرلىك ئەجەللىك ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ (S1 جەدۋەل).مېندېلنىڭ نىسبىتى تۇغۇلغاندا گېروروگېگوتنىڭ ھايات قېلىش نىسبىتىنىڭ تۆۋەنلىگەنلىكىنى كۆرسىتىپ بەردى (مۆلچەر 1.34 بىلەن 2.0).بىز گېروزوگېگوتنىڭ ئەتراپىدىكى تۆۋەن ئۆلۈش نىسبىتىنىڭ تۆۋەنلىكىنى بايقىدۇق ، بەزىلىرىدە دانىخورەك نورمالسىزلىقى بار (S3 رەسىم).قانداقلا بولمىسۇن ، بۇ ئەتراپىدىكى مېڭە قان تومۇرلىرىنىڭ سىڭىپ كىرىشىنىڭ تۆۋەن بولۇشى ئۇلارنىڭ ئاساسىي كېسەللىك قوزغاتقۇچ مېخانىزىمىنى تەتقىق قىلىشنى قىيىنلاشتۇرۇۋېتىدۇ.شۇڭلاشقا ، بىز ھەمجىنىسلىق Specc11 ئۆزگەرتكۈچىنىڭ تۆرەلمە خاراكتېرلىك ئەجەللىك فېنوت تىپىغا ئەھمىيەت بەردۇق.
كۆپىنچە بىرىكمە گېروزوگېنلىق ياكى ھەمجىنىسلىق Specc1lDTM096 / RRH048 ئۆزگىرىشچان تۆرەلمە E9.5-10.5 دىن كېيىن تەرەققىي قىلمىغان (5A - D رەسىملەر) ، نېرۋا نەيچىسى ئالدى بىلەن تاقىلىپ قالمىغان (5B ، D رەسىملەر) ، بەزىدە كەينى تەرىپى تاقىلىدۇ (كۆرسىتىلمەيدۇ) ..بۇ باش سۆڭەك نەيچىسى تاقاش كەمتۈكلىكى CNCC نىڭ كۆپىنچىسى E10.5 دىكى نېرۋا قاتلىمىدا قالغان DLX2 بەلگىسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇپ ، پارچىلىنىش يوقلىقىنى كۆرسىتىدۇ (5A'-D 'رەسىم).CNCC نىڭ ئومۇمىي چوڭ-كىچىكلىكىنىڭمۇ كىچىكلىگەن-ئازايمىغانلىقىنى ئېنىقلاش ئۈچۈن ، بىز Wnt1-Cre ۋە ROSAmTmG ئارقىلىق گېن تۇزاق لىنىيىمىزدە CNCC لىنىيىسىنى GFP بىلەن بەلگە قويدۇق.بىز بارلىق تۆرەلمىلەردىن GFP + NCC ۋە GFP- (RFP +) بولمىغان NCC نى رەتلەيمىز.E9.5 دە ، ئاقما تۈرگە ئايرىلغان GFP ماركىلىق CNCC لارنىڭ نىسبىتى WT بىلەن ئۆزگىرىشچان تۆرەلمە ئارىسىدا كۆرۈنەرلىك ئۆزگەرمىدى (كۆرسىتىلمىدى) ، بۇ CNCC نىڭ نورمال ئۆلچىمىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.شۇڭلاشقا ، بىز قالدۇق Wnt1-Cre ۋە DLX2 نىڭ ئاشكارلانغان نېرۋا قاتلىمىدا داغلانغانلىقىنى پەرەز قىلدۇق (5B رەسىم) CNCC قاتلىمىنىڭ كەمتۈكلىكىدىن بولۇشى مۇمكىن ، بۇ بەلكىم SPECC1L-kd ھۈجەيرىسىدە كۆرسىتىلگەندەك AJ ھۈجەيرىسىنىڭ زىچلىقى ياكى تارقىلىشىدىن بولغان بولۇشى مۇمكىن.بىز NCC بەلگىسىنى SOX10 ، AP2A ۋە DLX2 ئارقىلىق ئىشلىتىپ ، CNCC نىڭ نېرۋا قاتلىمىدا بارلىقىنى جەزملەشتۈردۇق (5E-R رەسىم).E8.5 دە ، NCC نىڭ ئۈچ بەلگىسىنىڭ ھەممىسىدە نېرۋا قاتلىنىشى WT (رەسىم 5E ، G ، I) ۋە Specc1l ئۆزگىرىشچان بۆلەكلەردە كۆرۈلدى (رەسىم 5F ، H ، J).E9.5 دە ، NCC بەلگىسى WT بۆلەكلىرىدە يۆتكىلىدىغان NCC داغلانغان بولسا (رەسىم 5M ، O ، Q) ، Specc1l ئۆزگىرىشچان تۆرەلمىنىڭ ئاشكارلانغان نېرۋا قاتلىمىدا قالدۇق NCC داغ بايقالغان (رەسىم 5N ، P ، R).SOX10 ۋە DLX2 يۆتكىلىشچان CNCC لارنى بەلگە قىلغانلىقتىن ، بۇ نەتىجە شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى ، SPECC1L كەمچىل CNCCs كۆچۈشتىن كېيىنكى ئۆلچەمگە يېتىدۇ ، ئەمما نېرۋا قاتلىمىدىن كۆچەلمەيدۇ.
Specc11 كەملىك كەمتۈك نېرۋا نەيچىسى تاقاشنى ، باش سۆڭەك نېرۋا ھۈجەيرىلىرى ۋە AJ نى يوقىتىشنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.
A)بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا ، Specc11 ئۆزگىرىشچان تۆرەلمە ئوچۇق نېرۋا قاتلىمى (B) ، ئوقيا) ۋە كۆچمىگەن CNCC لارنى كۆرسىتىدۇ (B '، ئوقيا)..WT E10. arrows).) بەزى داغلار (ئوقلار) بىلەن CNCC نىڭ ياخشى ئايرىش ۋە كۆچۈشىنى كۆرسىتىدۇ.ER) E8.5 (E - L) ۋە E9.5 (M - R) باسقۇچلىرىدىكى WT ۋە Specc1l ئۆزگىرىشچان تۆرەلمىنىڭ بۆلەكلىرىگە NCC بەلگىسى SOX10 (E, F, M, N) ، AP2A (G, H, O, P) and DLX2 (I, J, Q, R).E8.5 دە ، ياۋا تىپتىكى نېرۋا قاتلىمى (NF) ۋە ئۆزگىرىشچان بۆلەكلەردە NCC داغ بايقالغان.E8.5 WT (K) ۋە ئۆزگىرىشچان (L) دىكى SOX10 ۋە β- كاتېنېننىڭ ئورتاق داغلىنىشى نېرۋا قاتلىمىدىكى ھۈجەيرە چېگراسىدا β كاتېنېننىڭ داغلانغانلىقىنى ئاشكارىلىدى.E9.5 دە ، كۆچۈپ يۈرگەن CNCC (M, O, Q) نىڭ ياۋا تىپتىكى داغلىرى كۆرۈلگەن ، ئۆزگىرىشچان ۋاقىتتا ، تۇراقسىز CNCC لار ئوچۇق نېرۋا قاتلىمىغا داغ چۈشكەن (N, P, R)..ئوڭ تەرەپ ئۈستى بۇلۇڭدا تەخمىنىي بۆلەك ئايروپىلانى كۆرسىتىلدى.ئۆزگىرىشچان توقۇلمىلارنىڭ بۆلەكلىرىدە F-actin (S, T) ۋە مىئوسىن IIb (U, V) نىڭ داغلىرى كۆپەيدى.3-رەسىمدىكى ۋىرۇسنىڭ نەتىجىسىگە ئوخشاش ، ئۆزگىرىشچان تۆرەلمىدە β كاتېنېن (W, X) ۋە E- كادىرىن (Y, Z) نىڭ پەردىسىنىڭ داغلىنىشى كۈچەيگەن.(AA-BB) ياۋا تىپتىكى تۆرەلمىنىڭ بىر بۆلەكنىڭ ئېلېكترونلۇق مىكروگرافىيىسى ئاپپاق ئاساسىي ھۈجەيرىسىنىڭ چېگرىسىدىن ھالقىپ كەتكەن بولۇپ ، يېپىشقاق ئۇلىنىش (AA ، ئوق) لارنى كۆرسىتىدۇ.بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا ، Specc11 ئۆزگىرىشچان تۆرەلمە (BB ، ئوق) بۆلەكلىرىدە ، پۈتكۈل ئاپپوزا ئېغىزى ئېلېكترونلۇق زىچ بولۇپ ، يېپىشقاق ئۇلىنىشنىڭ زىچلىقى ۋە تارقىلىشىنى كۆرسىتىدۇ.
قاتلامنىڭ تۆۋەنلىشى AJ نىڭ ئۆزگىرىشىدىن بولغان پەرەزمىزنى سىناش ئۈچۈن ، بىز Specc1l ئۆزگىرىشچان تۆرەلمىنىڭ ئاشكارلانغان نېرۋا قاتلىمىدا AJ بەلگىسىنى تەكشۈردۇق (رەسىم 5S-Z).بىز ئاكتىن بېسىم تالاسىنىڭ كۆپىيىۋاتقانلىقىنى كۆردۇق (رەسىم 5S ، T) ۋە ماس قەدەملىك ھالدا myosin IIB نىڭ ئاكتىن تالالىرىغا داغ چۈشۈشنىڭ يەرلىكلەشتۈرۈلگەنلىكىنى كۆردۇق (5U ، V رەسىم).مۇھىمى ، بىز ھۈجەيرە ئارىلىقىدا β- كاتېنېن (5W ، X رەسىم) ۋە E- كادىرىن (5Y رەسىم ، Z) نىڭ داغنىڭ ئېشىپ كەتكەنلىكىنى كۆردۇق.بىز يەنە E8.5 تۆرەلمىنىڭ نېرۋا قاتلىمىدا NCC نىڭ β كاتېنېن داغلىرىنى تەكشۈردۇق (رەسىم 5K ، L).Specc1l ئۆزگىرىشچان نېرۋا قاتلىمىدا cat كاتېنېن داغ تېخىمۇ كۈچلۈك كۆرۈندى (رەسىم 5L ۋە K) ، بۇ AJ ئۆزگىرىشلىرىنىڭ باشلانغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.E9.5 تۆرەلمىنىڭ باش سۆڭىكى بۆلەكلىرىنىڭ ئېلېكترونلۇق مىكروگرافىدا ، بىز WT غا سېلىشتۇرغاندا Specc1l ئۆزگىرىشچان تۆرەلمىدە تارقىلىشچان ئېلېكترون زىچ داغنىڭ كۆپەيگەنلىكىنى يەنە بىر قېتىم كۆردۇق (رەسىم 5AA ، BB ۋە S1E-H).يىغىپ ئېيتقاندا ، بۇ نەتىجىلەر بىزنىڭ SPECC1L-kd U2OS ھۈجەيرىسىدىكى ۋىرۇس نەتىجىمىزنى قوللايدۇ ۋە ئۆزگەرتىلگەن AJ داغنىڭ ئۆزگىرىشچان تۆرەلمىمىزدە CNCC قاتلىنىشنىڭ ئالدىدا ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
AKT پائالىيىتى بىلەن E- كادىرىننىڭ مۇقىملىقى ئوتتۇرىسىدىكى مەشھۇر زىددىيەتلىك مۇناسىۋەتنى كۆزدە تۇتۇپ ، 17،28 بىز PI3K-AKT سىگنالىنىڭ قاتنىشىشىنى پەرەز قىلدۇق.ئۇنىڭدىن باشقا ، بىز بىر قىسىم ئۆزگىرىشچان تۆرەلمىلىرىمىزدە E9.5-10.5 دە ئەجەللىك (<5%) دىن قۇتۇلۇپ ، ئۇنىڭ ئورنىغا E13.5 ئەتراپىدا ئورۇنلاشقانلىقىنى كۆردۇق (S3 رەسىم).ئىككىلەمچى قان تومۇر PDGFRα12 نى ئاساس قىلغان PI3K-AKT سىگنالىنىڭ تۆۋەنلىگەنلىكىنىڭ ئالاھىدىلىكى.Fantauzzo قاتارلىقلار..دەرۋەقە ، Pan-AKT ۋە ئاكتىپ فوسفورلانغان Ser473-AKT نىڭ سەۋىيىسى Specc1l ئۆزگىرىشچان توقۇلمىلاردىكى vivo دا E9.5 تۆرەلمە تۇتۇلۇشىغا چۈشۈپ قالدى (6A-D رەسىم).فوسفورلانغان Ser473-AKT سەۋىيىسىنىڭ تۆۋەنلىشى پۈتۈنلەي vivo (FIG. 6E) ۋە ۋىرۇس (FIG. 6F) دىكى pan-AKT سەۋىيىسىنىڭ تۆۋەنلىشىدىن بولۇشى مۇمكىن.U2OS ھۈجەيرىلىرى ھۈجەيرە شەكلى ۋە AJ زىچلىقى بىلەن كۈچلۈك ماسلاشقاندىلا ئاندىن ۋىرۇسنىڭ تۆۋەنلىشى كۆرۈلگەن (6D رەسىم).شۇڭا ، بىزنىڭ سانلىق مەلۇماتلىرىمىز SPECC1L نىڭ مېڭە قان تومۇر كېسەللىكىدىكى سىگنال PI3K-AKT نىڭ يېڭى ئىجابىي تەڭشىگۈچ ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
. WT نى كونترول قىلىشقا سېلىشتۇرغاندا.غەربنىڭ پارچىلىنىشى ئوخشاش شارائىتتا ياۋا تىپتىكى لىزا ۋە ئۆزگىرىشچان لىمات ئۈستىدە ئېلىپ بېرىلدى.SPECC1L ئۈچۈن كۆرسىتىلگەن رەسىملەر بىر توپتىن تارتىلغان.ئوخشاش بىر بۆلەك ئېلىۋېتىلىپ ، پانۇسقا قارشى ACT ۋە act- ئاتىن ئانتىتېلاسى بىلەن قايتا تەكشۈرۈلدى.E8.5 نېرۋا قاتلىمىدىكى Pan-AKT سەۋىيىسى ۋە E9.5 باش سۆڭەك بۆلۈمىدىكى فوسفورلانغان S473-AKT نىڭ سەۋىيىسى كۆرۈنەرلىك تۆۋەنلىدى.(F) Pan-AKT سەۋىيىسى ئوخشاشلا يۇقىرى تۇتاشقان ۋاقىتتا يىغىۋېلىنغان SPECC1L-kd U2OS ھۈجەيرىسىنىڭ لىماتلىرىدا تۆۋەنلىدى.خاتالىق بالدىقى ئۈچ مۇستەقىل غەرب توپى سانىدىكى SEM غا ۋەكىللىك قىلىدۇ..Specc11 ئۆزگىرىشچان تۆرەلمە سېلىشتۇرۇشقا بولىدىغان ھۈجەيرىلەرنىڭ كۆپىيىشىنى كۆرسىتىدۇ (I) ، ئەمما ئاپتوماتىك داۋالاشنى قوبۇل قىلىدىغان ھۈجەيرىلەرنىڭ سانى كۆرۈنەرلىك كۆپەيدى (J).
ئاندىن كۆپىيىش ۋە ئاپتوماتىك داۋالاشنىڭ بەلگىسىنى تەكشۈردۇق.بىز E9.5 تۆرەلمىنىڭ كۆپىيىشىدە ھېچقانداق پەرقنى بايقىمىدۇق (رەسىم 6E ، G بىلەن سېلىشتۇرغاندا) ، WT ئۆزگىرىشچان ماددىلارنىڭ كۆپىيىش كۆرسەتكۈچى% 82.5 ، KI67 داغ بىلەن ئۆلچەنگەن Specc1l ئۆزگىرىشچانلىقى% 86.5 (p <0.56 ، Fisher's) ئېنىق سىناق).ئوخشاشلا ، بىز E8.5 دىكى نېرۋا قاتلىمىدىكى يېپىشقاق كاسپازا 3 نىڭ تۆرەلمە تۇتۇلۇشى (كۆرسىتىلمىگەن) (كۆرسىتىلمىگەن) گە قەدەر داغلاش ئارقىلىق ئۆلچەنگەن ئاپتوماتىك داۋالاشتا ھېچقانداق پەرقنى بايقىمىدۇق.بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا ، بارلىق E9.5 ئۆزگىرىشچان تۆرەلمىلەردە ئاپتوماتىك داۋالاش كۆرۈنەرلىك ئاشتى (6F ، H ۋە J رەسىم).ئاپتوماتىك داۋالاشنىڭ بۇ ئومۇمىي ئېشىشى PI3K-AKT سىگنالىنىڭ تۆۋەنلىشى ۋە بالدۇر تۆرەلمىنىڭ ئۆلۈش نىسبىتى 29،30،31 بىلەن بىردەك.
كېيىنكى قەدەمدە ، بىزنىڭ kd ھۈجەيرىمىزدىكى AJ ئۆزگىرىشىدىكى PI3K-AKT سىگنالىنىڭ سەۋەب رولىنى جەزملەشتۈرۈش ئۈچۈن ، بىز كونترول قىلىش ۋە kd ھۈجەيرىلىرىدىكى يولنى خىمىيىلىك ئۆزگەرتتۇق (7A-F).بىز تۇتاشتۇرۇلغان SPECC1L-kd ھۈجەيرىسىدە كۆزىتىلگەن ھۈجەيرە شەكلىنى ئۆزگەرتىش فېنوت تىپىغا بەلگە سۈپىتىدە قوللاندۇق ، بىز ئەڭ ئۇزۇن ئۆلچەم (ئۇزۇنلۇق) نىڭ ماس ھالدىكى تىك كەڭلىك (كەڭلىك) نىسبىتىنى ئىشلىتىپ مىقدارلاشتۇردۇق.نىسبەتەن يۇمىلاق ياكى كۇبوئىدلىق ھۈجەيرىلەرگە نىسبەتەن 1 نىسبەت مۆلچەرلەنگەن (7G رەسىم).ھۈجەيرە شەكلىدىن باشقا ، بىز يەنە β- كاتېنېن داغلاش ئارقىلىق AJ غا بولغان تەسىرىنى جەزملەشتۈردۇق (رەسىم 7A'-F ').PI3K-AKT يولىنى wortmannin ئارقىلىق چەكلەش كونترول ھۈجەيرىسىدىكى ھۈجەيرە شەكلىنى ئۆزگەرتىشكە يېتەرلىك ئىدى (7A ، C) ۋە AJ (7A رەسىم).PI3K-AKT ئاكتىپلىغۇچ SC-79 كونترول ھۈجەيرىسىدىكى ھۈجەيرە شەكلىگە (FIG. 7A, E) ياكى AJ كېڭىيىشىگە تەسىر كۆرسەتمىدى.SPECC1L-kd ھۈجەيرىسىدە ، PI3K-AKT يولىنى تېخىمۇ باستۇرۇش ئاپپتوزوزنىڭ كۆپىيىشىنى كەلتۈرۈپ چىقاردى (رەسىم 7B ، D) ۋە β كاتېنېن داغلىرى كۆرۈنەرلىك ئاشتى (7B رەسىم) ، بۇ بىزنىڭ vivo ئېغىر ئۆزگىرىشىمىز بىلەن بىردەك.مۇھىمى ، PI3K-AKT يولىنى قوزغىتىش ھۈجەيرە شەكلىنى كۆرۈنەرلىك ياخشىلايدۇ (7B ، F) ۋە AJ فېنوتىپلىرى (7B رەسىم).ھۈجەيرە شەكلىدىكى ئۆزگىرىش كاتەكچىنىڭ يۇمىلاق ئۈستەل نىسبىتى (CCR) سۈپىتىدە مىقدارلاشتۇرۇلۇپ ، يۇقىرىدا بايان قىلىنغاندەك ئەھمىيەتكە سېلىشتۇرۇلدى (FIG. 7G).دەرۋەقە ، كونترول ھۈجەيرىسىدە (رەسىم 7G ، CCR = 1.56) ، ۋورتماننىن داۋالاش ھۈجەيرە شەكلىنى كۆرۈنەرلىك ئۆزگەرتىشكە يېتەرلىك ئىدى (رەسىم 7G ، CCR = 3.61 ، p <2.4 × 10-9). in SPECC1L.-kd ھۈجەيرىلىرى (رەسىم 7G ، CCR = 3.46).SPECC1L-kd ھۈجەيرىسىنى Wortmannin داۋالاش (7G رەسىم ، CCR = 3.60 ، سەل قاراشقا بولمايدىغان) داۋالانمىغان kd ھۈجەيرىسى (7G رەسىم ، CCR = 3.46 ، سەل قاراشقا بولمايدىغان) ياكى ۋورتماننىن بىر تەرەپ قىلىنغان كونترول ھۈجەيرىسىدىن مۇھىم ئەمەس (7G رەسىم).، CCR = 3.46 ، سەل قاراشقا بولمايدىغان) قوشۇمچە ھۈجەيرىلەرنىڭ ئۇزىرىشىغا تەسىر كۆرسىتىدۇ (7G ، CCR = 3.61 ، سەل قاراشقا بولمايدۇ).ئەڭ مۇھىمى ، SC-79 AKT ئاكتىپلىغۇچ SPECC1L-kd ھۈجەيرىسىنىڭ ئۇزۇنغا سوزۇلغان فېنوت تىپنى ئەسلىگە كەلتۈردى (رەسىم 7G ، CCR = 1.74 ، p <6.2 × 10-12).بۇ نەتىجىلەر SPECC1L نىڭ PI3K-AKT سىگنالىنى تەڭشەيدىغانلىقىنى ئىسپاتلىدى ھەمدە SPECC1L نىڭ ئوتتۇراھال تۆۋەنلىشى ھۈجەيرىلەرنىڭ يېپىشقاقلىقىغا تەسىر قىلىدىغانلىقىنى ، كۈچلۈك تۆۋەنلەشنىڭ ئاپپتوز كېسىلىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بەردى (8-رەسىم).
(A - F ') كونترول (A, C, E) ۋە SPECC1L-kd (B, D, F) ھۈجەيرىلىرى PI3K-AKT يولىنى چەكلەش wortmannin (C, D) ياكى SC-79 ئاكتىپلىغۇچ (E, F) داۋالاش ئارقىلىق بىر تەرەپ قىلىندى. بىر تەرەپ قىلىنمىغان كونترول ھۈجەيرىلىرى كۇبوئىدلىق (A) نورمال β مۈشۈك ھۈجەيرىسىنىڭ داغلىنىشى (A ') ، kd ھۈجەيرىلىرى ئۇزىراپ (B) cat مۈشۈكنىڭ داغلىنىشى (B)).PI3K-AKT يولىنى باسقاندىن كېيىن ، كونترول ھۈجەيرىلىرى (C) β مۈشۈكنىڭ كېڭىيىشى (C ') بىلەن ئۇزىراپ كەتتى ، kd ھۈجەيرىلىرى ئاپپتوزوز (D) نى قوبۇل قىلىشقا باشلىدى ، بۇ بىزنىڭ ئىنتايىن ئۆزگىرىپ كەتكەن تۆرەلمىمىزگە ئوخشاش ۋە ئىنتايىن كۈچەيگەن β مۈشۈكنى كۆرسىتىدۇ.داغ (D ').PI3K-AKT يولى قوزغىتىلغاندىن كېيىن ، كونترول ھۈجەيرىلىرى كۇبوئىد (E) ھالىتىنى ساقلاپ ، نورمال β- مۈشۈك (E ') داغلانغان ، kd ھۈجەيرىلىرى ھۈجەيرە شەكلى (F) ۋە cat- مۈشۈك (F') دا كۆرۈنەرلىك ياخشىلانغانلىقىنى كۆرسىتىپ بەردى. (G) (AF) دىكى ھۈجەيرە شەكلىنىڭ ئۆزگىرىش دەرىجىسى ئەڭ ئۇزۇن ئۆلچەم (ئۇزۇنلۇق) ۋە ماس كېلىدىغان تىك ئۆلچەم (كەڭلىك) ئارقىلىق MetaMorph يۇمشاق دېتالى ئارقىلىق مىقدارلاشقان.بىر تەرەپ قىلىنمىغان (NT) SPECC1L-kd ھۈجەيرىلىرى (CCR = 3.46) كونترول ھۈجەيرىسىدىن كۆرۈنەرلىك ئۇزۇن (CCR = 1.56 ، p <6.1 × 10–13).ۋورتنىڭ كونترول ھۈجەيرىسىدىكى PI3K-AKT يولىنى چەكلىشى ھۈجەيرە شەكلىدە مۇشۇنىڭغا ئوخشاش ئۇزىراپ كېتىشنى كەلتۈرۈپ چىقاردى (CCR = 3.61 ، p <2.4 × 10-9).ئوخشاشلا ، SPECC1L-kd ھۈجەيرىسىدىكى SC-79 نىڭ AKT قوزغىتىشى ھۈجەيرىلەرنىڭ ئۇزىراپ كونترول دەرىجىسىنى ئەسلىگە كەلتۈردى (CCR = 1.74 ، p <6.2 × 10–12).SPECC1L-kd ھۈجەيرىسىنى Wortmannin داۋالاش ئاپپتوزوزنىڭ كۆپىيىشىنى كەلتۈرۈپ چىقاردى ، ئەمما كۆزىتىلگەن كۆزىتىلمىگەن kd (CCR = 3.46 ، ns) ياكى wortmannin داۋالانغان كونترول ھۈجەيرىسى (3.61) گە سېلىشتۇرغاندا ، ھۈجەيرە شەكلىنىڭ ئۆزگىرىشى (CCR = 3.60) كۆپەيمىدى.ns = ھېچقىسى يوق.+/- 50 ھۈجەيرە ئۈچۈن SEM ئۆلچەش كۆرسىتىلدى.ستاتىستىكا پەرقى ئوقۇغۇچىلارنىڭ T سىنىقىدىن پايدىلىنىپ ھېسابلىنىدۇ.
(1) PI3K-AKT يولىنى چەكلەش ۋە قوزغىتىشنىڭ سىخېمالىق ئىپادىلىنىشى ، ئايرىم-ئايرىم ھالدا AJ ئۆزگىرىشى ۋە قۇتقۇزۇشنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.(2) SPECC1L تەرىپىدىن AKT ئاقسىلىنى مۇقىملاشتۇرۇشنىڭ ئوتتۇرىغا قويۇلغان مودېلى.
ھامىلىدارلىقتىن بۇرۇنقى CNCC لار ئالدى نېرۋا قاتلىمى نېرۋا ھۈجەيرىسىدىن ئايرىلىش ئۈچۈن AJ لىزىسىنى تەلەپ قىلىدۇ.AJ زاپچاسلىرىنىڭ داغلىنىشى ۋە SPECC1L كەمتۈك ھۈجەيرىلەردە ھەم ۋىرۇس ۋە vivo دىكى ئاپېلسىن ئاساسى AJ سىممېترىك تەقسىماتنىڭ يوقىلىشى ، SPECC1L نىڭ cat كاتېنېنغا بولغان فىزىكىلىق يېقىنلىقى بىلەن بىرلەشتۈرۈلۈپ ، SPECC1L فۇنكسىيەسىنىڭ AJ يەرلىك مۇقىملىقىنى مۇۋاپىق قوغداشنى تەۋسىيە قىلىدۇ. تەشكىل مۇسكۇلى.actin cytoskeleton.SPECC1L نىڭ ئاكتىن سىتوسكېلېتون ۋە cat كاتېنېن بىلەن بولغان مۇناسىۋىتى ۋە SPECC1L بولمىغان ئەھۋال ئاستىدا قويۇقلاشقان ئاكتىن فىلمېننىڭ كۆپىيىشى AJ زىچلىقىنىڭ كۆزىتىلگەن ئېشىشى بىلەن بىردەك.يەنە بىر خىل ئېھتىماللىق شۇكى ، SPECC1L كەمچىل ھۈجەيرىلەردە ئاتىن تالالىرىنىڭ كۆپىيىشى ھۈجەيرىلەر ئارا جىددىيلىكنىڭ ئۆزگىرىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.ھۈجەيرە بېسىمى AJ 33 دىنامىكىسىغا تەسىر قىلىدىغان بولغاچقا ، توك بېسىمىنىڭ ئۆزگىرىشى تېخىمۇ كۆپ تارقىلىشچان AJ 34 نى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.شۇڭا ھەر قانداق ئۆزگىرىش CNCC قەۋىتىگە تەسىر كۆرسىتىدۇ.
Wnt1 دەسلەپكى نېرۋا قاتلىمىدا ئىپادىلىنىدۇ ، بۇ نېرۋا ھۈجەيرىسىنى پەيدا قىلىدۇ.شۇڭا ، Wnt1-cre نەسەب ئىز قوغلاش NCC35 نىڭ ئالدى-كەينىدە بەلگە بېرىدۇ.قانداقلا بولمىسۇن ، Wnt1 يەنە چىش مىلىكى توقۇلمىلىرى كلونلىرىنىڭمۇ دەسلەپكى نېرۋا قاتلىمىدىن 35،36 دىن ھاسىل بولغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ ، بۇ بىزنىڭ ئوچۇق نېرۋا قاتلىمىدا Wnt1 بەلگىسىنىڭ E9.5 ئۆزگەرتكۈچىنىڭ داغلىنىشى CNCC ئەمەس بولۇشى مۇمكىن.بىزنىڭ NCC بەلگىسى AP2A ۋە SOX10 غا بولغان ئاكتىپ داغلىرىمىز Specc11 ئۆزگىرىشچان تۆرەلمىنىڭ ئاشكارلانغان نېرۋا قاتلىمىدا ھەقىقەتەن CNCC بارلىقىنى ئىسپاتلىدى.بۇنىڭدىن باشقا ، AP2A ۋە SOX10 بالدۇر كۆچۈپ كەلگەن NCC نىڭ بەلگىسى بولغاچقا ، مۇسبەت داغ بۇ ھۈجەيرىلەرنىڭ كۆچكەندىن كېيىنكى CNCC ئىكەنلىكىنى ، E9.5 تەرىپىدىن قاتلىغىلى بولمايدىغانلىقىنى كۆرسەتتى.
سانلىق مەلۇماتلىرىمىزدىن ئايان بولۇشىچە ، SPECC1L تەرىپىدىن AJ نىڭ مولېكۇلا تەڭشىلىشى PI3K-AKT سىگنالى ئارقىلىق ۋاسىتە قىلىنغان.SPECC1L كەمتۈك ھۈجەيرە ۋە توقۇلمىلاردا AKT سىگنالى تۆۋەنلەيدۇ.Fantauzzo قاتارلىقلار تەرىپىدىن بايقالغان.PI3K-AKT سىگنالىنىڭ مېڭە قان تومۇر كېسەللىكىدىكى بىۋاسىتە رولىنى قوللاڭ..بىز يەنە PI3K-AKT يولىنى چەكلەشنىڭ U2OS ھۈجەيرىسىدىكى AJ ۋە ھۈجەيرە شەكلىنى ئۆزگەرتىشكە يېتەرلىك ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىمىز.بىزنىڭ بايقاشلىرىمىزغا ماس كېلىدىغان قابىل قاتارلىقلار.37 نىڭ كۆرسىتىشىچە ، بالىياتقۇ ئىچكى ھۈجەيرىسىدىكى PI3K α110 تارماق ئەترىتىنىڭ تەڭشىلىشى سىرتقى ھۈجەيرە β كاتېنېن داغنىڭ مۇشۇنىڭغا ئوخشاش كۆپىيىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىكەن ، بۇ «ئۇلىنىش كۆرسەتكۈچى» نىڭ ئېشىشىنى كۆرسىتىدۇ.قانداقلا بولمىسۇن ، بالىياتقۇ ئىچكى ھۈجەيرىسىدە ئاكتىن فىلمېنتى ئاللىقاچان يۇقىرى دەرىجىدە تەشكىللەنگەن بولۇپ ، PI3K-AKT يولىنى بېسىش بوش ھۈجەيرە شەكلىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا ، SPECC1L-kd U2OS ھۈجەيرىلىرى ئۇزۇنغا سوزۇلغان ھۈجەيرە شەكلىنى كۆرسەتتى.بۇ پەرق كاتەكچە تىپى بولۇشى مۇمكىن.PI3K-AKT سىگنالىنى بېسىش ئاتىن سىتوسكېلېتونغا مەڭگۈلۈك تەسىر كۆرسەتسىمۇ ، ئەمما ھۈجەيرە شەكلىگە بولغان تەسىرى مەركىزىي ئاكتىن تالاسىنىڭ زىچلىقى ۋە تەشكىللىنىشىنىڭ ئۆزگىرىشىدىن كېلىپ چىققان جىددىيلىكنىڭ ئۆزگىرىشى تەرىپىدىن بەلگىلىنىدۇ.U2OS ھۈجەيرىسىدە بىز پەقەت SPECC1L كەمتۈك AJ ئۆزگەرتىش ۋە ئەسلىگە كەلتۈرۈشنىڭ بەلگىسى سۈپىتىدە پەقەت ھۈجەيرە شەكلى ئۆزگىرىشىنى قوللاندۇق.خۇلاسىلىگەندە ، بىز قىياس قىلىمىزكى ، SPECC1L كەملىكتە AKT يولىنى چەكلەش AJ مۇقىملىقىنى ئاشۇرىدۇ ۋە CNCC دىكى ئايرىشنى ئازايتىدۇ.
قىزىقارلىق يېرى ، SPECC1L بولمىغان ئەھۋال ئاستىدا فوسفورلانغان 473-AKT سەۋىيىسىدىن باشقا ، ۋىرۇس ۋە vivo دا pan-AKT سەۋىيىسى تۆۋەنلىگەن ، بۇ PI3K-AKT سىگنالىنى AKT ئاقسىلنىڭ مۇقىملىقى ياكى ئايلىنىش سەۋىيىسىدە تەڭشەشنى تەۋسىيە قىلغان.SPECC1L ۋە MID1 گېنى ، ھەر ئىككىسى Opitz / GBBB ئۇنىۋېرسال كېسەللىكى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇپ ، 18،22 مىكرو مىكروبنى مۇقىملاشتۇرىدىغان ئاقسىلنى كودلايدۇ.SPECC1L ۋە MID1 ۋاسىتىلىك مىكرو قۇتۇبنى مۇقىملاشتۇرۇش مېخانىزمى تولۇق چۈشىنىلمىدى.SPECC1L غا كەلسەك ، بۇ مۇقىملاشتۇرۇش بىر تۈركۈم مىكرو قۇتۇبلارنىڭ ئاتسېتىلسىيەسىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.SPECC1L مۇشۇنىڭغا ئوخشاش مېخانىزم ئىشلىتىپ AKT قاتارلىق باشقا ئاقسىللارنى مۇقىملاشتۇرۇشى مۇمكىن.AKT ئاقسىلىدىكى لىزېن قالدۇقىنىڭ ئاتسېتىللىنىشى پەردىنىڭ يەرلىكلىشىشى ۋە فوسفورلىنىشنىڭ تۆۋەنلىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغانلىقى كۆرسىتىلدى.بۇنىڭدىن باشقا ، KT زەنجىرىنىڭ AKT دىكى ئوخشاش لىزېن قالدۇقىدىكى ھەممە يەرنى قاپلىشى ئۇنىڭ پەردىسىنى يەرلىكلەشتۈرۈش ۋە قوزغىتىش ئۈچۈن 39،40 تەلەپ قىلىنىدۇ.SPECC1L ئاقسىلى بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدىغان بىر قانچە ئامىللار ئىچىدە ، ھەر خىل يۇقىرى ئۈنۈملۈك ئېچىتقۇ ئېچىتقۇ ئىككى ئارىلاش ماتورلۇق ئېكراندا ، تۆت خىل - CCDC841 ، ECM2942 ، APC ۋە UBE2I43 قاتارلىقلار ئاقسىلنىڭ ئايلىنىشى ياكى مۇقىملىشىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك.SPECC1L بەلكىم AKT لىزېن قالدۇقىنى تەرجىمە قىلىنغاندىن كېيىنكى ئۆزگەرتىشكە قاتنىشىپ ، AKT نىڭ مۇقىملىقىغا تەسىر كۆرسىتىشى مۇمكىن.قانداقلا بولمىسۇن ، SPECC1L نىڭ AKT ئاقسىلىنىڭ يەرلىكلىشىشى ۋە مۇقىملىقىدىكى ھالقىلىق رولى تېخى ئېنىقلانمىدى.
Vivo دىكى SPECC1L ئىپادىسىدىكى ئېغىر نۇقسانلار AJ بەلگىسىنىڭ داغلىنىشى ۋە كەمتۈكلۈك CNCC نىڭ قاپلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقاردى ، شۇنداقلا ئاپتوماتىك داۋالاش ۋە بالدۇر تۆرەلمە ئۆلۈشنى كەلتۈرۈپ چىقاردى.ئىلگىرىكى دوكلاتلاردا كۆرسىتىلىشچە ، ئاپپتوزوزنىڭ يۇقىرى كۆتۈرۈلۈشى بىلەن چاشقاننىڭ ئۆزگىرىشى نېرۋا نەيچىسى كەمتۈكلىكى 44،45،46،47 ۋە دانىخورەك كەمتۈكلىكى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئىكەن.نېرۋا قاتلىمى ياكى يۇتقۇنچاق ئەگمىسىدىكى ھۈجەيرىلەرنىڭ ھەددىدىن زىيادە ئۆلۈپ كېتىشى مۇۋاپىق مورفوگېنتىك ھەرىكەت ئۈچۈن تەلەپ قىلىنغان ھۈجەيرىلەرنىڭ يېتەرلىك بولماسلىقى 48 مىليون 499،50 بولۇشى مۇمكىنلىكى ئوتتۇرىغا قويۇلغان.بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا ، SPECC1L كەمچىل بولغان ھۈجەيرە لىنىيىسى ئوتتۇراھال تۆۋەنلىتىلگەن SPECC1L ئىپادىسى ھۈجەيرىلەرنىڭ ئۆلۈشىنى ئىسپاتلايدىغان پاكىتسىزلا AJ ئۆزگىرىشىنى كۆرسەتتى.قانداقلا بولمىسۇن ، بۇ Kd ھۈجەيرىسىدىكى PI3K-AKT يولىنى خىمىيىلىك چەكلەش ئاپپتوز كېسىلىنى كەلتۈرۈپ چىقاردى.شۇڭا ، SPECC1L ئىپادىلەش ياكى ئىقتىدارنىڭ ئوتتۇراھال تۆۋەنلىشى ھۈجەيرىلەرنىڭ ھايات كەچۈرۈشىگە كاپالەتلىك قىلىدۇ.بۇ ئاز ئۇچرايدىغان Specc11 ئۆزگىرىشچان تۆرەلمىنىڭ پونكىتىدا قولغا ئېلىنىشتىن قېچىپ كەتكەن كۆزىتىش بىلەن بىردەك.E9.5 - بەلكىم گېن تۇتۇش ئۈنۈمىنىڭ تۆۋەنلىشى سەۋەبىدىن بولۇشى مۇمكىن ، ئۇلار نېرۋا نەيچىسىنى تاقاپ ، كېيىن تەرەققىي قىلىپ توختاپ قالىدۇ ، كۆپىنچە دانىخورەك كەمتۈك (S3 رەسىم).بۇنىڭ بىلەن بىردەك بولغىنى گېروزوگېنلىق Specc1l تۆرەلمىسىنىڭ دانىخورەك نورمالسىزلىقى بىلەن كەم ئۇچرايدىغان ھادىسە ، بەلكىم گېن تۇتۇش ئۈنۈمىنىڭ يۇقىرى كۆتۈرۈلگەنلىكىدىن بولۇشى مۇمكىن ، شۇنداقلا زىبرافىدا بايقالغان ئىككى SPECC1L ورتولوگىيىسىنىڭ بىرى (specc1lb) كېچىكىپ تۆرەلمە فېنوتىپلىرىنىڭ يوقىلىشىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. تۆۋەنكى ئېڭەك ۋە ئىككى تەرەپ يېرىلىش 51.شۇڭا ، ئىنسان بىمارلىرىدا بايقالغان كۆپ مەنبەلىك SPECC1L فۇنكىسىيەسىنىڭ ئۆزگىرىشى فۇنكىسىيەنىڭ ئۆزگىرىشىدە دانىخورەك كېسىلىنى چۈشەندۈرۈپ بېرەلەيدىغان SPECC1L ئىقتىدارىدا كىچىك توسالغۇلارنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن.SPECC1L نى ئاساس قىلغان ھۈجەيرىلەر ئارا ئالاقىنى تەڭشەش بەلكىم يۇتقۇنچاق پەردىسىنىڭ قېتىشىشى ۋە بىرىكىشىدە رول ئوينايدۇ.SPECC1L فۇنكسىيەسىنى يەنىمۇ ئىلگىرىلىگەن ھالدا تەتقىق قىلىپ ، نېرۋا ھۈجەيرىسىنىڭ ھەرىكەتلىنىشى ۋە مېڭە قان تومۇر ئۆسمىسىدىكى نېرۋا نەيچىسىنى تاقاش جەريانىدا CNCC دىكى ۋاقىتلىق ھۈجەيرە ئالاقىسىنىڭ رولىنى ئايدىڭلاشتۇرۇشقا ياردەم بېرىدۇ.
U2OS سۆڭەك شالاڭلىشىشنى كونترول قىلىش ۋە SPECC1L-kd ھۈجەيرىلىرى ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەن (Saadi et al., 2011).SPECC1L غا قارشى ئانتىتېلامۇ ئىلگىرى خاراكتېرلەنگەن (Saadi et al., 2011).Cat- كاتېنېنغا قارشى ئانتىتېلا (توشقان ؛ 1: 1000 ؛ سانتا كرۇز ، داللاس ، TX) ), MO)), E-cadherin (1: 1000; Abkam, Cambridge, MA), AP2A (1: 1000; Novus Biologicals, Littleton, Colo.), SOX10 (1: 1000; 1000; Aviva Systems Biology, San Diego كالىفورنىيە) . MO) تەسۋىرلەنگەندەك ئىشلىتىلگەن..ئاكتىن فىلمېنتلىرى ئاكتى داغلىق رودامىن فاللوئىدىن (Cytoskeleton, Denver, Colorado) بىلەن بويالغان.
U2OS كونترول ھۈجەيرىسى ۋە SPECC1L-kd ھۈجەيرىلىرى ئۆلچەملىك يۇقىرى گلۇكوزا DMEM دا% 10 تۆرەلمە كالا قان زەردابى تولۇقلانغان (ھاياتلىق تېخنىكىسى ، كارلسباد ، CA).AJ ئۆزگىرىشى ئۈچۈن ، 2 x 105 ھۈجەيرە% 0.1 لىك پورسىن ھايۋانات يىلىمى (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان ئەينەككە ئۇرۇق سېلىنىپ ، ھۈجەيرە شەكلىنىڭ ئۆزگىرىشى كۆزىتىلدى.ھۈجەيرىلەر ئوخشىمىغان كۆرسىتىلگەن ۋاقىت نۇقتىلىرىدا يىغىۋېلىندى: تېرىغاندىن 4 سائەت كېيىن (t = 1) ، تېرىغاندىن 24 سائەت كېيىن (t = 2) ، ھۈجەيرە شەكلى ئۆزگەرمەي تۇتاشتۇرۇش (t = 3) ، ھۈجەيرە شەكلىنىڭ ئۆزگىرىشى (t = 4) ، ھۈجەيرە شەكلى ئۆزگەرگەندىن كېيىن 24 سائەت (t = 5) ، ھۈجەيرە شەكلى ئۆزگەرگەندىن كېيىن 48 سائەت (t = 6) (رەسىم 1 ، 2 ، 3).PI3K-AKT يولىنى تەقلىد قىلىش ئۈچۈن ، PI3K-AKT ئىنگىبىتور wortmannin (TOCRIS بىئولوگىيە ئىلمى ، مىننېپولىس ، مىننېسوتا شىتاتى) ياكى SC-79 ئاكتىپلىغۇچىسى (TOCRIS بىئولوگىيە ئىلمى ، مىننېسوتا شىتاتى مىننېسوتا شىتاتى) بىلەن كۆرسىتىلگەن قويۇقلۇقتا ھۈجەيرىلەر يېتىشتۈرۈلدى.خىمىيىلىك ماددىلارنى ئۆز ئىچىگە ئالغان ۋاسىتە ھەر كۈنى ئالماشتۇرۇلدى.
نورمال مەدەنىيەت شارائىتىدا نەق مەيدان كونترول ۋە KD ھۈجەيرىسىدە رامكا بويىچە خاتىرىلەنگەن بولۇپ ، باسقۇچلۇق سېلىشتۇرما رەسىملەر ھەر 10 مىنۇتتا 7 كۈندە توپلانغان.رەسىملەر كومپيۇتېر كونتروللۇقىدىكى Leica DM IRB تەتۈر مىكروسكوپ ئارقىلىق مېخانىكىلىق باسقۇچ ۋە QImaging Retiga-SRV كامېراسىغا ئۇلانغان 10 × N-PLAN ئوبيېكتى ئارقىلىق سېتىۋېلىندى.تەسۋىر ھاسىل قىلىش جەريانىدا ،% 5 CO2 بولغان نەم كەيپىياتتا 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق ھۈجەيرە مەدەنىيىتى ساقلانغان.
رايون خاراكتېرلىك ئۆزگىرىشچان چاشقان بايلىق مەركىزى (UC Davis, CA) دىن كەلگەن ئىككى خىل گېن تۇزاق ES ھۈجەيرىسى DTM096 ۋە RRH048 بولۇپ ، Specc1lgtDTM096 ۋە Specc1lgtRRH046 قىلىپ بېكىتىلگەن.قىسقىچە قىلىپ ئېيتقاندا ، 129 / REJ ES ھۈجەيرىسى C57BL6 پارتلاتقۇچ ئوكۇلىغا ئوكۇل قىلىندى.نەتىجىدە چىملىق ئەر چاشقانلار ئايال C57BL6 چاشقان بىلەن يېتىشتۈرۈلۈپ ، ئاگۇتى چاپان رەڭگىدىكى ئەۋلادلارنى ئېنىقلىدى.گېن توزاق ۋېكتور قىستۇرمىسىنىڭ بارلىقى گېروزوگوتنى پەرقلەندۈرۈش ئۈچۈن ئىشلىتىلگەن.چاشقانلار 129 / REJ; C57BL6 ئارىلاشما ئارقا كۆرۈنۈشتە ساقلانغان.گېن تۇزاق ۋېكتورى قىستۇرۇلغان ئورۇننىڭ ئورنى RT-PCR ، گېن تەرتىپى ۋە گېن تولۇقلاش ئارقىلىق ئىسپاتلاندى (قوشۇمچە 1-رەسىم).CNCC نەسەبىنى قوش گېروزوگېنلىق Specc1lGT چاشقىنى ، ROSAmTmG (# 007576) ۋە Wnt1-Cre (# 003829) چاشقان (جېكسون تەجرىبىخانىسى ، بار پورتى ، ME) چاشقاندىن ھالقىپ ، Specc1l ئۆزگىرىشچان تۆرەلمىسىدە ROSAmTmG ۋە Wnt1-Cre allele ھاسىل قىلدى.چاشقاندىكى بارلىق سىناقلار كانزاس ئۇنۋېرسىتىتى داۋالاش مەركىزى ئورگان ھايۋاناتلارنى بېقىش ۋە ئىشلىتىش كومىتېتى تەستىقلىغان كېلىشىمگە ئاساسەن ئېلىپ بېرىلغان.
تۆرەلمە ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا 60 مىنۇت تۇرغۇزۇلدى (% 1 فورمالدېگىد ،% 0.2 گلۇتارالدېھىد ، 2 mM MgCl2 ،% 0.02 NP-40 ، 5 mM EGTA).X گال داغ ئېرىتمىسى ئوڭشالغاندىن كېيىن (5 mM كالىي فېررىئانىد ، 5 mM كالىي فېرروسىئانىد ، 2 mM MgCl2 ،% 0.01 ناترىي دېئوكسىخولات ،% 0.02 NP-40 ، 1 mg / ml X گال) داغ ئېچىش 37 سېلسىيە گرادۇستا ئېلىپ بېرىلدى. .° C 1-6 سائەت ئىچىدە.تۆرەلمە% 4 PFA دا مۇقىملاشتۇرۇلغان ۋە تەسۋىرلەنگەن.
غەربنىڭ پارچىلىنىشى ئۈچۈن ، ھۈجەيرىلەر پاسسىپ لىزلىق بۇففېرغا (Promega, Fitchburg, WI) HALT ئاقسىل چەكلىگۈچى (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) ئارىلاشتۇرۇلغان.Lysates% 12 پولىئاكرىلامىد Mini-PROTEAN TGX تەييار گېلى (Bio-Rad, Hercules, CA) دا پىششىقلاپ ئىشلىنىپ ، Immobilon PVDF پەردىسىگە يۆتكەلدى (EMD Millipore, Billerica, MA).پەردىلەر% 0.1 لىك PBS تەركىبىدىكى% 5 سۈتتە توسۇلۇپ قالدى.ئانتىتېلا بىر كېچىدىلا 4 سېلسىيە گرادۇس ياكى ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا بىر سائەت سىڭدۈرۈلدى.Femto SuperSignal West ECL رېئاكتورى (Thermo Scientific, Waltham, MA) سىگنال ھاسىل قىلىشتا ئىشلىتىلگەن.ئىممۇنىتېتلاش ئۈچۈن ، تۆرەلمە% 4 PFA / PBS دا بىر كېچىدىلا ئوڭشالدى ۋە مەخپىيلەشتۈرۈلدى.توقۇلما كرىستال ماددىلار PBS دا% 1 نورمال ئۆچكە قان زەردابى (Thermo Scientific, Waltham, MA) ۋە% 0.1 Triton X-100 (سىگما-ئالدرىچ ، ساينىت لۇئىس ، MO) بار توسۇلۇپ ، ئاندىن 4 سېلسىيە گرادۇسلۇق ئىنكۇباتوردا يوشۇرۇنغان. كېچە.ئانتىتېلاغا قارشى تۇرۇش ۋە فلۇئورېسسېنسىيەلىك ئىككىلەمچى ئانتىتېلا (1: 1000) بىلەن ° C4 قا 1 سائەت.داغلانغان بۆلەكلەر ProLong ئالتۇن ۋاستىسى (Thermo Scientific, Waltham MA) غا قويۇلغان بولۇپ ، لېيكا TCS SPE ماسلاشتۇرۇلغان مىكروسكوپ ئارقىلىق تەكشى رەسىملەر ئېلىنغان.ھەر بىر ئىممۇنىتېتلاش كەم دېگەندە ئىككى ئۆزگىرىشچان تۆرەلمىنىڭ ئايلىنىشىدا ئۈچ مۇستەقىل تەجرىبە سۈپىتىدە ئېلىپ بېرىلدى.ۋەكىللىك تەجرىبىسى كۆرسىتىلدى.
ھۈجەيرىلەر ئۆزگەرتىلگەن RIPA بۇففېر (20 mM Tris-HCl ، pH 8.0 ،% 1 NP-40 ، 130 mM NaCl ،% 10 گلىتسېرىن ، 2 mM EDTA ۋە HALT ئاقسىل چەكلىگۈچى (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) غا سىڭدۈرۈلگەن. قىسقىچە قىلىپ ئېيتقاندا ، لىماتلار ئاقسىل G ماگنىتلىق مونچاق (ھاياتلىق تېخنىكىسى ، كارلسباد ، CA) بىلەن ئالدىن تەييارلانغاندىن كېيىن ، SPECC1L ياكى IgG ئاقسىلى G ئاقسىل مونچاقلىرى بىلەن بىر كېچىدىلا 4 سېلسىيە گرادۇسلۇق سىلىندى. -β- كاتېنېن ئانتىتېلاسى يۇقىرىدا تەسۋىرلەنگەن بىرلەشمە IP تەجرىبىسى تۆت مۇستەقىل تەجرىبىنىڭ ۋەكىلى.
كانزاس ئۇنۋېرسىتىتى داۋالاش مەركىزىدىكى ئېلېكترونلۇق مىكروسكوپ مەركىزىگە مۇقىم مەدەنىيەتلىك ھۈجەيرە ياكى چاشقان تۆرەلمە توقۇلمىلىرى تەمىنلەندى.قىسقىچە قىلىپ ئېيتقاندا ، ئەۋرىشكەلەر EMbed 812 قالدۇقلىرىغا (ئېلېكترون مىكروسكوپ ئىلمى ، فورت ۋاشىنگتون ، PA) قىستۇرۇلدى ، بىر كېچىدىلا 60 سېلسىيە گرادۇسلۇق پولىمېرلاشتۇرۇلدى ، ئالماس تىغ ئورنىتىلغان لېيكا UC7 ئۇلترا بىنەپشە نۇر ئارقىلىق 80 nm غا بۆلۈندى.بۆلەكلەرگە 100 كىلوۋولتلۇق Lab6 مىلتىق ئورنىتىلغان JEOL JEM-1400 يوللاش ئېلېكترونلۇق مىكروسكوپ ئارقىلىق تەسۋىرلەنگەن.
بۇ ماقالىنى قانداق نەقىل كەلتۈرۈش: ۋىلسون ، NR قاتارلىقلار.SPECC1L كەمچىل بولسا ، بوغۇملارنىڭ بوغۇملىرىنىڭ مۇقىملىقىنى ئاشۇرۇپ ، باش سۆڭەك نېرۋا ھۈجەيرىسىنىڭ يوقىلىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.the science.6 ، 17735;doi: 10.1038 / srep17735 (2016).
Saint-Jeanne, J.-P.نېرۋا ئۇۋىسىنى كىرگۈزۈش ۋە پەرقلەندۈرۈش.(Springer Science + Business Media; Landes Bioscience / Eurekah.com, 2006).
كوردېرو ، DR قاتارلىقلار.ھەرىكەتچان مېڭە نېرۋا ھۈجەيرىلىرى: ئۇلارنىڭ چوڭ مېڭىنىڭ يېتىلىشىدىكى رولى.American Journal of Medical Genetics.A قىسمى 155A ، 270–279 ، doi: 10.1002 / ajmg.a.33702 (2011).
بولاند ، RP Neurocristopathia: ئۇنىڭ 20 يىلدىن بۇيانقى ئۆسۈشى ۋە تەرەققىياتى.بالىلار كېسەللىكلىرى دوختۇرى.پاتولوگىيە.تەجرىبىخانا.medicine.17 ، 1-25 (1997).
مانگولد E. ، Ludwig KU ۋە Noten MM بۆسۈش ئېغىزىنىڭ گېنىتىكى بۆسۈش.مولېكۇلا تېبابىتى يۈزلىنىشى 17 ، 725–733 ، دوي: 10.1016 / j.molmed.2011.07.007 (2011).
مىنۇ ، م.تەرەققىيات 137 ، 2605-2621 ، دوي: 10.1242 / dev.040048 (2010).
Dixon, MJ, Marazita, ML, Beaty, TH and Murray, JK Cleft لەۋ ۋە ئېغىز: ئىرسىيەت ۋە مۇھىتنىڭ تەسىرىنى چۈشىنىش.تەبىئىي باھا.ئىرسىيەت 12 ، 167 - 178 ، دوي: 10.1038 / nrg2933 (2011).
Ingram, CR et al.تېرە ، پۇت-قول ۋە دانىخورەك رايونىنىڭ نورمالسىز مورفوگېنىزىم ئارىلىقىدىكى تەڭشەش-كونترول قىلىش ئامىلى -6 (Irf6) - كەمتۈك چاشقان.National Genette.38 ، 1335–1340 ، doi: 10.1038 / ng1903 (2006).
Peyrard-Janvid, M. قاتارلىقلار.GRHL3 دىكى ئاساسلىق ئۆزگىرىشلەر ۋان دېر Waord ئۇنىۋېرسال كېسەللىكىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ ۋە ئېغىز ئەتراپىنىڭ يېتىلىشىگە تەسىر كۆرسىتىدۇ.Am J Hum Genet 94 ، 23–32 ، doi: 10.1016 / j.ajhg.2013.11.009 (2014).
خاررىس ، MJ ۋە جۇرىلوف ، DM نېرۋا نەيچىسى تاقاشتا كەمتۈكلۈك بولغان چاشقان ئۆزگىرىشچان تىزىملىكىنى يېڭىلاپ ، نېرۋا نەيچىسى تاقاشنى تولۇق گېن چۈشەنچىسىگە قاراپ ئىلگىرىلەيدۇ.تۇغۇلۇشتىكى كەمتۈكلۈكنى تەكشۈرۈش.A قىسمى ، كلىنىكىلىق ۋە مولېكۇلا تېرە كېسەللىكلىرى 88 ، 653–669 ، دوي: 10.1002 / bdra.20676 (2010).
Fantauzzo, KA & Soriano, P. PI3K ۋاسىتىلىك PDGFRalpha سىگنالى p53 غا تايىنىدىغان ھۈجەيرە يولى ئارقىلىق سۆڭەك تەرەققىياتىدىكى ھايات قېلىش ۋە كۆپىيىشنى تەڭشەيدۇ.گېن تەرەققىياتى 28 ، 1005–1017 ، doi: 10.1101 / gad.238709.114 (2014).
Kopp, AJ, Green, ND and Murdoch, JN Disheveled: بىرىكمە كېڭىيىشنىڭ نېرۋا نەيچىسى تاقاش بىلەن مۇناسىۋىتى.نېرۋا كېسەللىكلىرى يۈزلىنىشى.26 ، 453–455 ، doi: 10.1016 / S0166-2236 (03) 00212-1 (2003).