310 10 * 1mm داتلاشماس پولاتتىن ياسالغان تۇرۇبا خىمىيىلىك تەركىب ، سىپروئىننىڭ N تېرمىنال دائىرىسى ئامىلوئىد تالاسىنى ئاساس قىلغان ھىدروگېل ھاسىل قىلىپ ، ئاقسىلنىڭ ھەرىكەتسىزلىنىشى ئۈچۈن سەھنە ھازىرلاپ بېرىدۇ.

Nature.com نى زىيارەت قىلغىنىڭىزغا رەھمەت.سىز چەكلىك CSS قوللىشى بىلەن توركۆرگۈ نۇسخىسىنى ئىشلىتىۋاتىسىز.ئەڭ ياخشى تەجرىبە ئۈچۈن يېڭىلانغان تور كۆرگۈچنى ئىشلىتىشىڭىزنى تەۋسىيە قىلىمىز (ياكى Internet Explorer دىكى ماسلىشىشچان ھالەتنى چەكلەڭ).ئۇنىڭدىن باشقا ، داۋاملىق قوللاشقا كاپالەتلىك قىلىش ئۈچۈن ، ئۇسلۇب ۋە JavaScript بولمىغان تور بېكەتنى كۆرسىتىمىز.
تام تەسۋىردە ھەر بىر تام تەسۋىردە ئۈچ ماقالە كۆرسىتىلىدۇ.كەينى ۋە كېيىنكى كۇنۇپكىلارنى ئىشلىتىپ تام تەسۋىردىن يۆتكىڭ ياكى ئاخىرىدا تام تەسۋىر كونترول كۇنۇپكىسى ئارقىلىق ھەر بىر تام تەسۋىردىن ئۆتۈڭ.

Specification

310 10 * 1mm داتلاشماس پولاتتىن ياسالغان تۇرۇبا بىلەن تەمىنلىگۈچىلەر

خىمىيىلىك تەركىب

مېخانىكىلىق خۇسۇسىيىتى

قايتا ھاسىل بولىدىغان ئۆمۈچۈك يىپەك ئاقسىلى (ئۆمۈچۈك يىپەك ئاقسىلى) نىڭ يېڭى بىئولوگىيىلىك ماددىلارنى تەرەققىي قىلدۇرۇشتا نۇرغۇن يوشۇرۇن قوللىنىشچانلىقى بار ، ئەمما ئۇلارنىڭ كۆپ خىل شەكىل ۋە يىغىلىشچانلىقى ئاسان بولغاچقا ، ئېرىشمەك تەس ۋە ئىشلىتىش ئاسان.بۇ يەردە بىز قايتا ھاسىل بولىدىغان كىچىك تىپتىكى سپرودروئىن ئاقسىلى ۋە ئەڭ مۇھىمى N تېرمىنال دائىرسىنىڭ (NT) ئۆزى 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق تېزلىكتە ئۆز-ئۆزىنى قوللايدىغان ۋە سۈزۈك ھىدروگېن ھاسىل قىلىدىغانلىقىنى دوكلات قىلىمىز.NT ۋە يېشىل فلۇئورېسسېنسىيە ئاقسىلى ياكى پۇرىن يادروسى فوسفورلازادىن تەركىب تاپقان بىرىكتۈرۈش ئاقسىلى تولۇق ئىقتىدارلىق بىرىكتۈرۈش ئاقسىلىنى ھاسىل قىلىدۇ.Hydrogels.نەتىجىمىز شۇنى ئىسپاتلىدىكى ، قايتا ھاسىل بولىدىغان NT ۋە بىرىكتۈرۈش ئاقسىلى يۇقىرى ئىپادىلەش ئۈنۈمى بىلەن تەمىنلەيدۇ ۋە ھىدروگېلنى سۈزۈكلۈك ، ئۆز-ئارا گىرەلىشىپ كەتمەسلىك ۋە يۇقىرى زىچلىقتىكى ئاكتىپ ئاقسىلنى بىۋاسىتە ھەرىكەتلەندۈرۈش قاتارلىق جەلپ قىلىش كۈچىگە ئىگە قىلىدۇ.
ئۆمۈچۈكنىڭ ئوخشىمىغان يەتتە يۈرۈش يىپەك بەزلىرى بار ، ھەر بىرىدە ئالاھىدە بىر خىل يىپەك ئىشلەپچىقىرىلىدۇ.يەتتە خىل يىپەك تۈرىنىڭ ھەممىسى ئۆمۈچۈك يىپەك ئاقسىلى (ئۆمۈچۈك) تەخمىنەن 6000 قالدۇقتىن تەركىب تاپقان بولۇپ ، شارسىمان N ۋە C تېرمىنال دائىرىسى (NT ۋە CT) بىلەن قورشالغان چوڭ مەركىزى تەكرار رايوننى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.ئەڭ كۆپ تەتقىق قىلىنغان يىپەك تۈرى ، دەسلەپكى ئامپۇللا دەسلەپكى ئامپۇللا بېزى تەرىپىدىن ئىشلەپچىقىرىلىدۇ.بۇ بەزدە ، ئېپىتېلىيە ھۈجەيرىسىنىڭ يەككە تەنچىسى سىپروئىن ئاقسىلىنى بىرىكتۈرۈپ ، بەزنىڭ لۆڭگىسىگە ئاجرىتىپ چىقىرىدۇ ، ئۇلار ئىنتايىن يۇقىرى قويۇقلۇقتا (% 30-% 50 w / v) ئېرىيدىغان شەكىلدە بولىدۇ.بەز بېزىدىكى ئاساسلىق ئامپۇللار سپرودروئىن ئاقسىلىنىڭ تەشكىللىنىشى ۋە ئۆزگىرىشى توغرىسىدا مۇنازىرىلەر ئېلىپ بېرىلدى ، ئەمما كۆپىنچە تەجرىبە ئىسپاتلىرى ئادەتتە خىلىتلىق ۋە ياكى تاسادىپىي خىلىتلىق ئۆزگىرىش ۋە مىكرو ياكى لامپا قۇرۇلمىسىنىڭ 5،6،7،8،9،10 ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.تەكرارلانغان دائىرە يىپەك تالانىڭ مېخانىكىلىق خۇسۇسىيىتىنى تەڭشەپ ، β ۋاراق نانو كىرىستال ۋە ئامورفوس قۇرۇلمىسىنى شەكىللەندۈرىدۇ ، 11،12،13،14،15،15 ، ئاخىرقى ساھە دائىرە يىپەك تالالىرىنى تەڭشەپ ، يىپەك بېزى بويىدىكى شارائىتنىڭ ئۆزگىرىشىگە ئاساسەن 16،17،18.يىپەكنىڭ شەكىللىنىشىنى كونترول قىلىش ئارقىلىق ، 19. تېرمىنال دائىرە تەدرىجىي ھالدا قوغدىلىدۇ ، ئۇلارنىڭ رولى بارلىق سپرودروئىن ئاقسىلىغا ئورتاق بولۇشى مۇمكىن.بەزدىن ئۆتۈش جەريانىدا ، ئۆمۈچۈكنىڭ pH قىممىتى تەخمىنەن 7.6 دىن <5.716 گە تۆۋەنلەيدۇ ۋە ئاستا-ئاستا تارىيىدىغان نەيچە ئارقىلىق ھەرىكەت ئارقىلىق ۋاسىتىلىك قىرقىش ۋە سوزۇلۇش بىلەن كۆپىيىدۇ.ھەل قىلىش چارىسىدە ، CT α خىلىتلىق تەشكىل قىلغۇچى پاراللېل dimer17 ، ئەمما تۆۋەن pH ۋە قىرقىش كۈچىگە قارىتا ، CT ئېچىلىدۇ ۋە ئالماشتۇرىدۇ β قەۋەت 16 ، 17 ، بەلكىم 16-ئايلانمىنىڭ تەكرارلانغان رايونلىرىدا β قەۋەتنى قوزغىتىشى مۇمكىن. شارائىت بەزنىڭ لۆمۈلدىشىنى ئەكس ئەتتۈرىدىغان ۋە ئۆمۈچۈكنىڭ ئېرىشچانلىقىنى ۋاسىتە قىلىدىغان شارائىت ، ئەمما pH تۆۋەنلىگەندە ، بىر تۈركۈم كاربون كىسلاتالىق يان زەنجىرنىڭ پروتونلىشىشى NT نىڭ pKa بىلەن تەخمىنەن 6.5 لىك ۋاقىتسىزلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ ، بۇ ئارقىلىق NT نى مۇقىملاشتۇرىدۇ ۋە چوڭ تەرەت تۇڭىنى ئوڭشايدۇ. مىقدارى.network16,18.شۇڭا ، NT ئىنچىكە شەكىللىنىشتە ئاچقۇچلۇق رول ئوينايدۇ ، سىردىكى مونومېردىن تالادىكى دىمېرغا ئۆزگىرىدۇ 23،24،25.NT ھازىرغا قەدەر تەتقىق قىلىنغان 16 ، 18 ، 19 ، 20 ، 26 ، 27 ، 28 ، 29 غىچە بولغان بارلىق شارائىتتا يۇقىرى ئېرىيدىغان ۋە تەۋرىنىشچان ھالەتتە تۇرىدۇ ، بۇ ئۇنىڭ گېروگولوگىيەلىك ئاقسىل ئىشلەپچىقىرىشىنىڭ ئېرىشچانلىقىنى ئاشۇرۇش بەلگىسى سۈپىتىدە تەرەققىي قىلىشىغا ئىلھام بەردى.
قايتا ھاسىل بولىدىغان كىچىك ئۆمۈچۈك يىپەك ئاقسىلى ، بىر NT ، بىر قىسقا تەكرارلىنىدىغان رايون ، بىر CT ۋە His6 بەلگىسى (His-NT2RepCT) دىن تەركىب تاپقان بولۇپ ، سۇ بۇففېردا يەرلىك ئۆمۈچۈك يىپەك ئاقسىلىغا ئوخشاش ئېرىيدۇ ۋە يىپەك ئۆمۈچۈكنىڭ يەرلىك مۇھىم ئالاھىدىلىكلىرىنى دورىغان. .قاپلاش 25.31.ئۇنىڭ- NT2RepCT بىئولوگىيىلىك خىمىيىلىك ماشىنا ئارقىلىق ئۈزلۈكسىز تالاغا ئايلىنالايدۇ ، بۇنىڭدا pH 8 ئېرىيدىغان سىر pH 525،32،33،34،35 سۇ مۇنچىسىغا چىقىرىلىدۇ.E.-coli نىڭ بىئولوگىيىلىك رېئاكسىيەسى ئۇنىڭ NT2RepCT ۋە كېيىنكى داۋالاشتىن كېيىن ئىپادىلەنگەندىن كېيىن ، ساپلاشتۇرۇلغاندىن كېيىن> 14 g / L مەھسۇلات ھاسىل قىلدى.ئۇنىڭ يۇقىرى ھوسۇلى ، ئېرىشچانلىقى يۇقىرى ۋە ئۇنىڭ- NT2RepCT نىڭ كىسلاتالىق شارائىتقا بولغان ئىنكاسىنىڭ ھەممىسى NT23 ، 25 ، 34.
بۇ يەردە بىز 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق ئاقسىل ئېرىتمىسىنى سىڭدۈرۈش ئارقىلىق يالغۇز NT نى ئۆز ئىچىگە ئالغان قايتا ھاسىل بولىدىغان سپروئىن ئاقسىلىدىن سۈزۈك ھىدروگېننىڭ تېز شەكىللەنگەنلىكىنى دوكلات قىلىمىز.Thioflavin T فلۇئورېسسېنسىيىسى (ThT) ، فورىيېر ئىنفرا قىزىل نۇرلۇق سپېكتروسكوپ (FTIR) ، يادرو ماگنىتلىق رېزونانىس سپېكتروسكوپى (NMR) ۋە ئېلېكترونلۇق مىكروسكوپ (TEM) نى ئىشلىتىپ ، NT ۋە مىكرو مىكرو ئاقسىلنىڭ قۇرۇلمىنىڭ β جەدۋەل ۋە ئامىلوئىدقا ئوخشاش تالاغا ئۆزگىرىدىغانلىقىنى بايقىدۇق. گېلى ھاسىل بولغاندا.ئۇنىڭدىن باشقا ، NT ۋە يېشىل فلۇئورېسسېنسىيە ئاقسىلى (GFP) ياكى پۇرىن يادروسى فوسفورلازا (PNP) نىڭ بىرىكتۈرۈش ئاقسىلى تولۇق ئىقتىدارلىق بىرىكمە پارچىلىرى بىلەن ھىدروگېن ھاسىل قىلىدۇ.گېروئولوگىيىلىك ساھىبجاماللارنىڭ يۇقىرى ئۈنۈملۈك ئىپادىلىنىشى ، فىزىئولوگىيىلىك شارائىتتا ھىدروگېلنىڭ تېز شەكىللىنىشىگە قوشۇلۇپ ، ئىنژېنېرلىق ئىقتىدارى بار ھىدروگېننىڭ ئەرزان ئۈنۈملۈك ئىشلەپچىقىرىش مۇمكىنچىلىكىنى ئاچىدۇ.
كۆپىنچە خەۋەر قىلىنغان قايتا ھاسىل بولىدىغان سپروئىن ئاقسىلىغا ئوخشىمايدىغىنى ، His-NT2RepCT Tris-HCl بۇففېردا pH 8 دە مۇقىم بولۇپ ، يامغۇر يېغىشتىن 500 مىللىگىرامغا يېتىدۇ.شۇڭلاشقا ، بىز بۇ ئاقسىلنىڭ ° C 37 قا چىققان ۋاقىتتا ئوپتىكىلىق سۈزۈك ، ئۆز-ئۆزىنى قوللايدىغان ھىدروگېلنىڭ تېز شەكىللىنىدىغانلىقىنى بايقىدۇق (رەسىم 1b-d).كېيىنكى تەتقىقاتلاردا كۆرسىتىلىشىچە ، ئۇنىڭ NT2RepCT نىڭ قويۇقلۇقى ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقى (10 ~ 300 mg / mL) ئەتراپىدا يۈز بەرگەن بولۇپ ، بۇ قويۇقلۇق دەرىجىسى گېنىراتسىيە ۋاقتى بىلەن تەتۈر تاناسىپلىق مۇناسىۋەتتە بولغان (1c رەسىم ۋە قوشۇمچە 1-رەسىم).His-NT2RepCT نىڭ قايسى قىسىملىرىنىڭ ھىدروگېل ھاسىل قىلىشىنى ۋاسىتە قىلىدىغانلىقىنى بىلىش ئۈچۈن ، ئاندىن بىز ھەر بىر تور نامىنى ئايرىم-ئايرىم ۋە ھەر خىل بىرىكمىلەردە چاقماق تەتۈر ئايلىنىش ئارقىلىق تەكشۈردۇق (1a ، b).قايتا ھاسىل بولغان سپرودروئىننىڭ بارلىق سىناق قىلىنغان بۆلەكلىرى چۆكۈپ كەتكەن 2Rep نى ھېسابقا ئالمىغاندا ، 1 سائەتكە يەتمىگەن ۋاقىت ئىچىدە گېلى (ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقى 300 mg / mL) ھاسىل قىلدى. (1b رەسىم)بۇ پەقەت NT ۋە CT نىڭلا بىرلەشتۈرۈلۈپ ياكى تەكرارلىنىش بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇپ ، ° C 37 قا يېيەلەيدىغانلىقىنى ۋە His6 بەلگىسىنىڭ بۇ جەريانغا كۆرۈنەرلىك تەسىر كۆرسەتمەيدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.NT نىڭ يۇقىرى ئېرىيدىغان ۋە تۇراقلىق ئاقسىل ئىكەنلىكى توغرىسىدىكى ئورتاق قاراشنى كۆزدە تۇتقاندا ، قايتا ھاسىل بولىدىغان سپروئىن ھىدروگېلنىڭ ئىلگىرىكى دوكلاتىدا گېنىرال ئېففېكتىنى تەكرارلانغان رايون ۋە ياكى CT لارنىڭ ماس ئۆزگىرىشى بىلەن باغلىغانلىقى نەزەردە تۇتۇلغاندا ، NT نىڭ ئۆزى شۇنداق قىلىشى مۇمكىن.ھايۋانات يىلىمىنىڭ بايقىلىشى ئويلىمىغان يەردىن بولدى.قوشۇمچە جەدۋەل 1) 37 ، 38 ، 39. كىشىنىڭ دىققىتىنى تارتىدىغىنى شۇكى ، NT ئاللىقاچان 10 مىنۇت ئىچىدە 300 مىللىگىرام / mL قويۇقلۇق دەرىجىسىگە يەتتى (1c رەسىم).NT نىڭ ھەرخىل قويۇقلۇقى بىلەن Vial تەتۈر ئايلىنىش تەجرىبىسى شۇنى ئىسپاتلىدىكى ،> 50 mg / mL لىك NT ئېرىتمىسى ماس كېلىدىغان قويۇقلۇقتىكى His-NT2RepCT غا قارىغاندا تېز سۈرئەتتە پارقىرايدۇ (w / v ، 1c رەسىم).
بۇ ئەسەردە تەتقىق قىلىنغان ھەر خىل تېز سۈرئەتلىك قۇرۇلۇشلارنىڭ سىخېمالىق ئىپادىلىنىشى.b گېلى 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق ھەر خىل قايتا ھاسىل بولىدىغان سپروئىن ئاقسىلى (300 mg / mL) قاچا-قۇچىلارنى تەتۈر ئايلىنىش ئارقىلىق دەلىللەنگەن.CT گېلى يوشۇرۇن ھالەتتە (<300 mg / mL) ، 2Rep چۆكمىسى (300 mg / mL ، 5 مىللىمېتىر).c Gel-His-NT2RepCT ۋە NT نىڭ ئاقسىل قويۇقلۇقى 37 سېلسىيە گرادۇس.d His-NT2RepCT ۋە NT ھىدروگېلنىڭ ئۆمۈچۈك بىلەن چۈشكەن سۈرىتى ۋە ئاستىغا بېسىلغان «NT» ھەرىپى ئايرىم-ئايرىم ھالدا (ھەر ئىككىسى 200 mg / mL ، چوڭلۇقى 5 مىللىمېتىر).
ھەر خىل قايتا ھاسىل بولىدىغان سپرودروئىن ئاقسىلى ھاسىل قىلغان ھىدروگېلنىڭ رەڭگى سەل ئوخشىمايدۇ ، كۆزنى كۆزىتىش ئوخشىمىغان دەرىجىدە سۈزۈكلۈكنى كۆرسىتىدۇ (1b رەسىم).NT گېلى ئالاھىدە ئېنىق بولۇپ ، باشقا گېلى ئوچۇق بولۇپ قالىدۇ.ئۇنىڭ سىلىندىرلىق تۇرۇبىغا تاشلانغان NT -R2CT ۋە NT گېلى قېلىپتىن مۇكەممەل چىقىرىۋېتىلىدۇ (رەسىم 1d).
شارائىتتا تەبىئىي ئۆمۈچۈك يىپەك يېپىنچا يىلىمىنىڭ قايتا ھاسىل بولىدىغان ئۆمۈچۈك ئاقسىلىنىڭ گېلىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغانلىقىنى تەكشۈرۈش ئۈچۈن ، شىۋىتسىيە كۆۋرۈك ئۆمۈچۈكى (Larinioides sclopetarius) نىڭ چوڭ ئامپۇللا بېزىدىن سىرلار يىغىۋېلىندى.سىر 20 mM Tris-HCl بۇففېردا 50 mg / mL (ئۆلچەملىك قۇرۇق ئېغىرلىقنى ئاساس قىلغان) دا ساقلانغان ، ئەمما 21 سېلسىيە گرادۇسلۇق ھاۋارايىدا ° C 37 بولغان (ھېچقانداق قوشۇمچە ماتېرىيال 2a).
بۇ گېلىنى مىقدارلاشتۇرۇش ئۈچۈن ، رېئولوگىيىلىك ئۆلچەش ئارقىلىق گېلىلىشىش جەريانىنى تەتقىق قىلىپ ، ئومۇمىي مېخانىكىلىق خۇسۇسىيەتنى بەلگىلىگىلى بولىدۇ.بولۇپمۇ يۇقىرى تېمپېراتۇرىدا ساقلاش مودۇلى (ئېلاستىكىلىقى) نى نازارەت قىلىش گېلىنىڭ تېمپېراتۇرىسى شۇنداقلا سىرنىڭ يېپىشقاقلىق خۇسۇسىيىتى ھەققىدە ئۇچۇر بىلەن تەمىنلەيدۇ.تېمپېراتۇرا ئۆرلەش تەجرىبىسى (25 سېلسىيە گرادۇستا ° C 25-45 سېلسىيە گرادۇستا ئىشلىتىلىدۇ)كۆپەيتىلدى (2-رەسىم ۋە قوشۇمچە 3-رەسىم).تىلغا ئېلىشقا ئەرزىيدىغىنى ، NT مودۇلى His-NT2RepCT غا سېلىشتۇرغاندا تۆۋەن تېمپېراتۇرىدا ئۆسۈشكە باشلىغان ، بۇ NT نىڭ 37 سېلسىيە گرادۇستا His-NT2RepCT بىلەن بىۋاسىتە سىڭدۈرۈلگەندە كۆرۈلگەن تېز سۈرئەتلىك گېلى بىلەن بىردەك (1-رەسىم).كېيىنكى تېمپېراتۇرا تۆۋەنلىگەندىن كېيىن ، ساقلاش مودۇلى تۆۋەن قىممەتكە قايتمىدى ۋە زىيان مودۇلىنىڭ ئۈستىدە قالدى (قوشۇمچە 3-رەسىمگە قاراڭ) ، بۇ ئىسسىقلىق ئەسلىگە كەلتۈرگىلى بولمايدىغان تۇراقلىق ھالەتنى كۆرسىتىدۇ.گېنىراتسىيە قىلىنغاندىن كېيىن ، ئەڭ ئاخىرقى ئېلاستىك مودۇل 100- 500 mg / mL قويۇقلۇقىدىكى His-NT2RepCT ھىدروگېننىڭ 15 دىن 330 kPa ئارىلىقىدا ، NT ھىدروگېلنىڭ ئەڭ ئاخىرقى ئېلاستىك مودۇلى (100 ~ 500 mg / mL) 2 دىن 1400 گىچە. kPa (رەسىم ، 2 ۋە تولۇق رېمونت سانلىق مەلۇماتلىرى) قوشۇمچە 3-رەسىمگە قاراڭ).
His-NT2RepCT (300 mg / mL) ۋە b NT (300 mg / mL) ئۆلچەش جەريانىدا تېمپېراتۇرا ئۆزگىرىشى.ئوقيا تېمپېراتۇرا يۈزلىنىشىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ ، ساقلاش مودۇلى سانلىق مەلۇماتلىرىنىڭ يېنىك سايىسى سايماننىڭ تۆۋەن بۇرۇلۇش قىممىتىدە سىناقنى تەسۋىرلەپ بېرىدۇ ، بۇ شاۋقۇننىڭ كۈچىيىشىدىكى سەۋەب.c تېمپېراتۇرا يۇقىرى كۆتۈرۈلگەندىن كېيىن His-NT2RepCT ۋە NT نىڭ ئاخىرقى مودۇل يىغىلىشى (100 ، 300 ۋە 500 mg / mL).بارلىق بۆلەك ئوقۇشلۇقى 0.1 Hz چاستوتىدا ئېلىنىدۇ.
ھايۋانات يىلىمى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ماسلىشىشچان ئۆزگىرىشلەرنى تەكشۈرۈشنىڭ يوشۇرۇن ئۇسۇلى بولۇش سۈپىتىمىز بىلەن ، بىز ئۇنىڭ NT2RepCT ۋە NT نىڭ FTIR سپېكترىنى 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق ھاۋارايىنىڭ ئالدى-كەينىدە خاتىرىلىدۇق (3a رەسىم ، b).ئويلىغىنىدەك ، His-NT2RepCT ۋە NT ھەل قىلىش لايىھىسىنىڭ سپېكترى α-helix / ئىختىيارى كاتەكچە ئىككىلەمچى قۇرۇلمىنى كۆرسىتىدىغان ئاقسىلغا ماس كەلگەن بولۇپ ، تەلەپپۇزى 1645 cm-1 بولغان.ھەر ئىككى ھىدروگېلغا نىسبەتەن ، يېپىشقاقلىقى ئوتتۇرا I گۇرۇپپىدا تەخمىنەن 1617 cm-1 ۋە 1695 cm-1 ئەتراپىدا ئىككى قولنىڭ شەكىللىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقاردى (3a رەسىم ، b) ، بۇ ئانتىتېلاغا قارشى β جەدۋەل قۇرۇلمىسىنىڭ شەكىللەنگەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.بۇ ئۆزگىرىشلەرنى مۇناسىپ ئىككىنچى تۇغۇندى ۋە پەرقلەندۈرۈش يىلىمى سپېكترىدىمۇ ئېنىق كۆرگىلى بولىدۇ (قوشۇمچە 4b رەسىم).NT β قەۋىتىنىڭ ئىككى بەلبېغى His-NT2RepCT غا قارىغاندا تېخىمۇ كۆرۈنەرلىك بولۇپ ، NT ھىدروگېلدىكى β قەۋەت بەلۋاغنىڭ ئومۇمىي مەزمۇنىنىڭ NT2RepCT ھىدروگېلدىن يۇقىرى ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
His-NT2RepCT ۋە b NT (ھەر ئىككىسى 500 mg / mL) نىڭ FTIR سۈمۈرۈلۈش سپېكترى (ھەل قىلىش چارىسى) ۋە 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق (گېلى) يوشۇرۇنغاندىن كېيىن.c TEM رەسىملىرى توختىتىلغان 50 mg / ml NT2RepCT گېلى ۋە d NT.تارازىسى 200 nm.e-NT2RepCT ۋە NT ھىدروگېننىڭ تالا دىئامېتىرى.n = 100 ئۆلچەملىك تالا ، p <0.0001.خاتالىق بالدىقى ئۆلچەملىك ياتلىشىشنى كۆرسىتىدۇ.خاتالىق بالدىقىنىڭ مەركىزى ئوتتۇراھال.ستاتىستىكىلىق ئانالىز ئۈچۈن جۈپلەشتۈرۈلمىگەن T سىناق (ئىككى قۇيرۇق) ئىشلىتىلگەن.f ھەر خىل قايتا ھاسىل بولىدىغان سپرودروئىن ئاقسىلىنىڭ ThT فلۇئورېسسېنسىيىسى (100 mg / mL) 37 سېلسىيە گرادۇس.g NT (100 mg / mL) ئوكۇل سېلىش تەجرىبىسى 100 mg / mL NT گېلىدىن% 0 ،% 5 ،% 10 ۋە% 20 ئۇرۇق.
ئېلېكترونلۇق مىكروسكوپ (TEM) ئارقىلىق گېلىنى ئانالىز قىلغاندا ھىدروگېلنىڭ ئامىلوئىدقا ئوخشاش تالادىن تەركىب تاپقانلىقى كۆرسىتىلدى (3c ، 3d رەسىم).NT شەكىللەنگەن تالا ئۇزۇنغا سوزۇلغان (دىئامېتىرى 5 - 12 nm) ۋە شاخلانمىغان ، His-NT2RepCT تالانىڭ ئۇزۇنلۇقى قىسقا ، دىئامېتىرى كۆرۈنەرلىك كەڭ (7-16 nm) (3e رەسىم).بۇ نەتىجىلەر تىيوفلاۋىن T (ThT) تەكشۈرۈشى ئارقىلىق تالا كېسىلىنىڭ ھەرىكەتلىرىگە ئەگىشىشىمىزگە يول قويدى.بارلىق قايتا ھاسىل بولىدىغان سپروئىن ئاقسىلىغا نىسبەتەن ، ئەۋرىشكە ° C 37 قا يەتكەندە فلۇئورېسسېنسىيە سىگنالى كۆپەيدى (3f رەسىم ، قوشۇمچە 5a رەسىم).بۇ بايقاشقا ماس ھالدا ، NT ۋە His-NT2RepCT نىڭ مىكروسكوپ تەكشۈرۈشىدە گېلى شارائىتىدا ThT فلۇئورېسسېنسىيەسىنىڭ بىردەك ئاشقانلىقى ، ThT مۇسبەت يىغىلغان ماددىلارنىڭ يەرلىك توپلىنىشى كۆرۈنەرلىك بولمىغانلىقى كۆرسىتىلدى (قوشۇمچە رەسىم 5b ، c).ThT مۇسبەت تالانىڭ شەكىللىنىشى NT ۋە ئۇنىڭ- NTCT تۇراقسىزلىقىنىڭ ئېشىشىغا ئەگىشىپ كەلمىگەن (قوشۇمچە رەسىم 5d) ، يەنى گېلىدىكى تالا تورىنىڭ گېلىنىڭ ئېنىقلىقىغا تەسىر يەتكۈزمەي شەكىللىنىدىغانلىقىدىن دېرەك بېرىدۇ.ئاز مىقداردا ئالدىن شەكىللەنگەن تالا قوشۇش ئارقىلىق تېرىش بەزى ئامىلوئىدلارنىڭ تالا شەكىللىنىشىنى كۆرۈنەرلىك تېزلىتىدۇ 42،43،44 ، ئەمما NT سۇيۇقلاندۇرۇلغان ماددىلارنىڭ ئېرىتمىسىگە% 5 ،% 10 ياكى% 20 (w / w) NT قوشۇلىدۇ.ئۇرۇق سېلىش ئۈنۈمى (3g رەسىم).بەلكىم بۇ ھىدروگېلدىكى تالالارنىڭ بىر قەدەر مۇقىم بولغانلىقى ۋە ئۇرۇق ئورنىدا ئىشلىتىشكە بولمايدىغانلىقى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇشى مۇمكىن.
ئويلىمىغان يەردىن يۇقىرى تېمپېراتۇرىدا قايتا ھاسىل بولىدىغان سپروئىن ئاقسىلىنىڭ ھەرىكىتى يادرو ماگنىتلىق رېزونانىس (NMR) سپېكتروسكوپ تەتقىقاتىنى ئىلگىرى سۈرۈپ ، گېلىنىڭ شەكىللىنىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ماسلىشىشچانلىقىنى ئېنىقلاپ چىقتى.ئۇنىڭ 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق ۋاقىت ئىچىدە خاتىرىلەنگەن His-NT2RepCT ھەل قىلىش لايىھىسىنىڭ NMR سپېكترىدا CT نىڭ يەنىلا قىسمەن قاتلانغانلىقى كۆرسىتىلدى ، ئەمما NT ۋە 2Rep سىگنالى غايىب بولدى (4a رەسىم) ، بۇ ئاساسلىقى NT ۋە 2Rep نىڭ ئۇنىڭ شەكىللىنىشىنى قىسمەن كونترول قىلىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. NT2RepCT ھىدروگېل.CT سىگنالىمۇ ئەسلىدىكى كۈچلۈكلۈكنىڭ% 20 گە يېقىنلاشقان ، بۇ CT نىڭمۇ ئاساسەن مۇقىم ۋە ھىدروگېل قۇرۇلمىسىغا كىرگۈزۈلگەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.CT نىڭ كىچىكرەك قىسمىغا نىسبەتەن ، ئۇ ئالدىنئالا ئەۋرىشكە ئېلىنغانغا ئوخشاش كۆچمە ، شۇڭا NMR ھەل قىلىش چارىسى ئارقىلىق كۆزىتىلگەن ، سپېكترا ئالدىنقى 10 قۇرۇلمىلىق قالدۇققا سىگنال كەمچىل ، بۇ بەلكىم ئۇنىڭ NT-NT2Rep نىڭ ئۇلانغان قىسمىنىڭ يۆتكىلىشى تەس بولۇشى مۇمكىن.ھىدروگېلنىڭ NMR سپېكترى -NT2RepCT α- ھېلىس ۋە β قەۋىتىنىڭ ئاساسلىق مەۋجۇتلۇقىنى ئاشكارىلىدى ھەمدە مەلۇم مەنىدىن ئېيتقاندا ، تاسادىپىي كاتەكچە شەكىللەندى (4b رەسىم).پەقەت NT دا بار بولغان مېتونىن قالدۇقىنىڭ خىمىيىلىك يۆتكىلىش ئانالىزىدا بۇ ساھەنىڭ et جەدۋەل قۇرۇلمىسىغا ئۆزگەرتىلگەنلىكى كۆرسىتىلدى.NT نىڭ ھەل قىلىش چارىسىدىكى ۋاقىتقا باغلىق سپېكترى سىگنالنىڭ كۈچلۈكلۈك دەرىجىسىنىڭ بىردەك تۆۋەنلىگەنلىكىنى كۆرسەتتى (4c رەسىم) ، NT ھىدروگېننىڭ قاتتىق ھالەتتىكى NMR كۆرسىتىشىچە ، NT قالدۇقلىرىنىڭ كۆپىنچىسى β جەدۋەل قۇرۇلمىسىغا ئۆزگەرتىلگەن (4d رەسىم).2Rep نىڭ ئۆزگىرىشىنى توپلاش خاھىشى سەۋەبىدىن ئايرىم بەلگىلىگىلى بولمىدى.قانداقلا بولمىسۇن ، NTCT ۋە His-NT2RepCT ھىدروگېننىڭ مۇستەھكەم ھالەتتىكى NMR سپېكترى قارىماققا ناھايىتى ئوخشىشىپ كېتەتتى (4b رەسىم ؛ قوشۇمچە 6b رەسىم) ، بۇ 2Rep نىڭ His-NT2RepCT ھىدروگېلنىڭ قۇرۇلما قىسمىغا ئازراق تۆھپە قوشقانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.CT ھىدروگېلغا نىسبەتەن α- ھېلىس ، β جەدۋەل ۋە ئىختىيارى خىلىتلىق ئىككىلەمچى قۇرۇلمىلارنىڭ بارلىقى بايقالدى (قوشۇمچە 6d رەسىم).بۇ CT نىڭ بىر قىسىم بۆلەكلىرىنىڭ α- ھېلىس ھالەتتە قالغانلىقىنى ، بەزىلىرىنىڭ β جەدۋەلگە ئايلانغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.شۇڭا ، NMR سپېكتروسكوپنىڭ نەتىجىسى NT نىڭ ھىدروگېلنىڭ شەكىللىنىشىدە موھىم ئىكەنلىكىنى ، شۇنداقلا 2Rep ۋە CT بىلەن بىرىكتۈرۈلگەندىن كېيىن β جەدۋەلگە ئايلىنىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بەردى.بۇنىڭغا ماس ھالدا ، بىز يېقىندا ئاممىياك بوشلۇق سىيرىلغۇچنىڭ NT ساھەسىنىڭ بەش خىلىنىڭ ھەممىسىدە شەكىللىنىشى مۇمكىنلىكىنى بايقىدۇق ، ۋالتىس ئالگورىزىم ئالېكىس 1 دىكى ئامىلوئىدوگېن رايونىنى ئالدىن پەرەز قىلدى (4e رەسىم).
2D سپېكترى 15N-HSQC 10 mg / mL His-NT2RepCT ئېرىتمىسىدىن ئىلگىرى (كۆك) ، 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق يوشۇرۇن ھالەتتە (قىزىل) 19 سائەتتىن كېيىن.قىزىل سپېكترىدىكى يەككە كرېست چوققىسى ۋە كۆك سپېكترىدىكى F24 ، G136 ، polyA يەككە ھەرىپ ئامىنو كىسلاتا بەلگىسى ۋە قالدۇق سانلار بىلەن ئىپادىلىنىدۇ.بۇ قىستۇرمىلار NT ، 2Rep ۋە CT ساھەلىرىدىكى تاللانغان قالدۇقلارغا سىگنالنىڭ كۈچلۈكلۈك دەرىجىسىگە باغلىق ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.b His-NT2RepCT ھىدروگېننىڭ قاتتىق ھالەتتىكى رادىئو چاستوتىسى (RFDR) سپېكترى.RFDR سپېكترىدا كۆزىتىلگەن Cα / Cβ قالدۇقلىرىنىڭ باغلىنىشى مودېل پېپتىد خىمىيىلىك ئۆزگىرىش ۋە ستاتىستىكا 8283 ۋە ئۇلارنىڭ ئىككىلەمچى قۇرۇلمىسىدىن كەلگەن قىممەتلەر بىلەن سېلىشتۇرۇش ئارقىلىق بېكىتىلدى.SSB - ئايلانما يان بەلۋاغ.c 15N-HSQC 10 mg / mL NT ئېرىتمىسىنىڭ بىر ئۆلچەملىك سپېكترى 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق ھاۋارايىدا 36 سائەت.بۇ قىستۇرما ۋاقىت بىلەن ھەجىمدىكى كۈچلۈكلۈكنى كۆرسىتىدۇ.d NT ھىدروگېننىڭ قاتتىق ھالەتتىكى RFDR سپېكترى.RFR سپېكترىدا كۆزىتىلگەن Cα / Cβ قالدۇقلىرى ۋە ئۇلارنىڭ ئىككىلەمچى قۇرۇلمىسىنىڭ باغلىنىشى كۆرسىتىلدى.e Zipper سانلىق مەلۇمات ئامبىرىدىكى NT45.79 تالالىق مايىللىق ئارخىپىغا ئاساسەن (https://services.mbi.ucla.edu/zipperdb/).ئالتە تەرەپلىك پېپتىدنىڭ بوشلۇقتىكى چاقماق يۆتكىلىش كۆزنىكىنىڭ Rosetta ئېنېرگىيىسى kcal / مولدا كۆرسىتىلدى.قىزىل تاياقچە تالا ئۆسمىسىنىڭ يۇقىرىلىقى بىلەن ئالتە ئوكسىدنى كۆرسىتىدۇ (Rosetta ئېنېرگىيىسى -23 kcal / مولدىن تۆۋەن ؛ چېكىتلىك سىزىقنىڭ ئاستىدا).يېشىل بالداقلار Rosetta ئېنىرگىيىسى بىلەن چەكتىن ئېشىپ كەتكەن پارچىلارنى كۆرسىتىدۇ.پرولىننى ئۆز ئىچىگە ئالغان پارچىلار ئانالىزدىن چىقىرىۋېتىلدى (تۈۋرۈكسىز).مەيدانلار Waltz algorithm81 (https://waltz.switchlab.org) ئالدىن پەرەز قىلغان ئامىلوئىدوزنىڭ رايونلىرىنى كۆرسىتىدۇ.NT نىڭ ئامىنو كىسلاتا قالدۇقىنىڭ رەت تەرتىپى ئەڭ ئۈستىدە بولۇپ ، β ئىككىلەمچى قۇرۇلمىدا (قاتتىق ھالەتتىكى NMR سپېكتروسكوپ تەرىپىدىن بەلگىلىنىدۇ) بايقالغان قالدۇق تۈرلەر قىزىل رەڭدە كۆرسىتىلدى.بەش NT α-helices نىڭ ئورنى (H1-H5) 28 قىلىپ بېكىتىلگەن.
PH <6.5 دە ، HT تۆۋەنلەيدۇ ، ئىسسىقلىق ياكى ئۇرېيە كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغان ئايرىشقا چىداملىق 18.NT نىڭ ۋاقىتسىزلىنىشى ۋە مۇقىملىقىنىڭ گېلىغا قانداق تەسىر كۆرسىتىدىغانلىقىنى ئېنىقلاش ئۈچۈن ، 100 مىللىگىرام / مىللىلىتىرلىق NT نى ئۆز ئىچىگە ئالغان ئېرىتمىلەر pH 8 ، 7 ۋە 6 دە كونترول قىلىنغان.PH 8 ۋە 7 دە ساقلانغان NT ئەۋرىشكىسى 30 سېلسىيە گرادۇستىن 30 سېلسىيە گرادۇستىن كېيىن يېلىندى ، ئەمما pH 8 گېلى يەنىلا ئېنىق بولدى ، pH 7 گېلى بولسا كۆرۈنەرلىك چۆكمە پەيدا قىلدى (5a رەسىم).بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا ، pH 6 دىكى HT نى ئۆز ئىچىگە ئالغان ئېرىتمە گېلى ھاسىل قىلمىدى ، 37 سېلسىيە گرادۇستا 20 مىنۇتتىن كېيىن چوڭ ھۆل-يېغىننى كۆرگىلى بولىدۇ.بۇ مونومېرلارغا سېلىشتۇرغاندا ئۆزىنى ۋە ياكى ئۇلارنىڭ تېخىمۇ يۇقىرى مۇقىملىقىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.NT نىڭ pH 7 ۋە 6 دە چۆكمە ھاسىل بولۇشى مۆلچەرلەنمەيتتى ، چۈنكى NT نىڭ 200 mg / ml27 دە ئېرىيدىغانلىقى ، ئىسسىقلىق تۆۋەنلىگەندىن كېيىن ئاسانلا قايتىلىنىدىغانلىقى ، شۇنداقلا تۆۋەن قىممەتتىكى α-helix نى ساقلايدىغانلىقى خەۋەر قىلىنغان. pH 18. بۇ ئوخشىماسلىقلارنىڭ مۇمكىنچىلىكى بولغان بىر چۈشەندۈرۈش شۇكى ، ئىلگىرى دوكلات قىلىنغان سىناقلار ئۆي تېمپېراتۇرىسى ياكى ئۇنىڭدىن تۆۋەن ياكى ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقى بىر قەدەر تۆۋەن بولغان 16،18،19.
NT vial تەتۈر ئايلىنىش سىنىقى (100 mg / mL) pH 8 ، 7 ، 6 ۋە 154 mM NaCl (pH 8) دە ° C 37 قا چىققاندىن كېيىن.b NT CD سپېكترى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 154 mM NaF ۋە 154 mM NaCl.222 nm دىكى موللاق ئېللىپتسىيىسى تەبىئىي قاتلىنىش نىسبىتىگە ئايلىنىدۇ.c NT تەتۈر ئايلىنىش (100 mg / mL) NT * (37 ° C ۋە 60 ° C) ، NTA72R (37 ° C) ، ۋە ئۇنىڭ NT-L6 (37 ° C ۋە 60 ° C).d NT ئۆزگىرىشچان NT * ، NTA72R ۋە His-NT-L6 نىڭ CD سپېكترى.222 nm دىكى موللاق ئېللىپتسىيىسى تەبىئىي قاتلىنىش نىسبىتىگە ئايلىنىدۇ.e NTFlSp ، NTMiSp نىڭ تەتۈر ئايلىنىش سىنىقى ۋە NTMiSp (100 mg / mL) تۆۋەنلىدى.تارازىسى 5 مىللىمېتىر.NT ، NTFlSp ، NTMiSp نىڭ CD سپېكترى ۋە NTMiSp نى ئازايتتى.222 nm دىكى موللاق ئېللىپتسىيىسى تەبىئىي قاتلىنىش نىسبىتىگە ئايلىنىدۇ.تولۇق NT سپېكترى 25 سېلسىيە گرادۇس ۋە 95 سېلسىيە گرادۇسلۇق قوشۇمچە 8-رەسىمدە كۆرسىتىلدى.
فىزىئولوگىيىلىك تۇزنىڭ قويۇقلۇقى NT تارماق تارماقلىرىنىڭ ئېلېكتر سىستىما ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىشىنى ۋە NT نىڭ تۆۋەن pH18 غا يۆتكىلىشىنى بەلگىلەيدۇ.بىز 154 mM NaCl ۋە NaF نىڭ مەۋجۇتلۇقىنىڭ ئايرىم-ئايرىم ھالدا گېلىنى تىزگىنلەشنى چەكلىگەنلىكىنى بايقىدۇق (رەسىم 5a ، b ؛ قوشۇمچە رەسىم 2b) ۋە بۇ تۇزلار NT مونومونلىرىنىڭ ئىسسىقلىق مۇقىملىقىنى ئاشۇردى (5b رەسىم ، قوشۇمچە 8-رەسىم). .ئۇ يەنە تۇراقسىزلىقنى كۈچەيتىشنىڭ ئەمەس ، بەلكى گېلىنىڭ شەكىللىنىشىنىڭ ئالدىنى ئالىدىغانلىقىنى ئوتتۇرىغا قويدى.
ئاقسىلنىڭ ۋاقىتسىزلىنىشى ۋە تۇراقلىشىشنىڭ رولى ئۈستىدە يەنىمۇ ئىزدىنىش ئۈچۈن ، بىز NT * ۋە NTA72R دىن ئىبارەت ئىككى خىل ئۆزگىرىشچان ماددىنى ئىشلەتتۇق ، بۇلارمۇ تۆۋەن pH28.30 دە مونوپول ھالەتتە تۇرىدۇ.NT * قوش زەرەتلەش تەتۈر ئۆزگىرىشچان بولۇپ ، مونومېرنىڭ كۆرۈنەرلىك ئىككى قۇتۇپلۇق توك تەقسىملىنىشى تەكشى بولۇپ ، ۋاقىت سىزىقىنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ ۋە مونومېرنىڭ مۇقىملىقىنى زور دەرىجىدە ئاشۇرىدۇ.NTA72R توك قاچىلانغان چۆكمە ، ئەمما Arg نىڭ ئورنىنى ئالغان ئالا ۋاقىت سىزىقىغا جايلاشقان ، شۇڭا ئۆزگىرىشلەر ۋاقىت سىزىقى ئۈچۈن تەلەپ قىلىنغان تارماق تارماق ئۆز-ئارا تەسىرگە تەسىر كۆرسىتىدۇ.37 سېلسىيە گرادۇسلۇق يوشۇرۇن ھالەتتە ، NT * ھىدروگېل ھاسىل قىلمىدى ، NTA72R بولسا 15 مىنۇتلۇق سۈزۈك گېلىنى ھاسىل قىلدى (5c رەسىم).NT * ۋە NTA72R ھەر ئىككىلىسى ۋاقىتنى كىچىكلىتەلمەيدۇ ، ئەمما مونومېرنىڭ مۇقىملىقىدا پەرقلىنىدۇ (رەسىم 5d) ، بۇ نەتىجىلەر يۇقىرى ئىسسىقلىق دىنامىكىلىق مۇقىملىقنىڭ NT نىڭ قېتىپ قېلىشىنىڭ ئالدىنى ئالىدىغانلىقىنى كۈچلۈك كۆرسىتىپ بەردى.بۇنى HT * يۇقىرى تېمپېراتۇرىدا تۇراقسىز تۇرغاندا گېلى ھاسىل قىلىدۇ (60 سېلسىيە گرادۇستا 8 مىنۇتتىن كېيىن ؛ 5c رەسىم).بۇنىڭدىن ئىلگىرى NT دىكى مېتونىننىڭ مىقدارىنىڭ تەبىئىي قاتلىنىشىنى سۇيۇقلاندۇرىدىغانلىقى ۋە ئالتە Met نىڭ لېينىڭ ئورنىنى ئالىدىغانلىقى (بۇ يەردە His-NT-L6 دېيىلىدۇ) NT46 مونوموننى كۈچلۈك مۇقىملاشتۇرىدىغانلىقى كۆرسىتىلدى.NT گېلىنىڭ شەكىللىنىشى ئۈچۈن قۇرۇلما ئەۋرىشىملىكى تەلەپ قىلىنىدۇ دېگەن پەرەزگە ئاساسەن ، بىز ئۇنىڭ NT-L6 تۇراقلىق ئۆزگىرىشىنىڭ ° C 37 قا چىقمىغانلىقىنى بايقىدۇق (5c رەسىم ، d).قانداقلا بولمىسۇن ، His-NT-L6 يەنە 60 سېلسىيە گرادۇسلۇق 60 مىنۇتتا يوشۇرۇن ھالەتتە گېلى ھاسىل قىلغان (5c رەسىم).
NT نىڭ β ۋاراق قۇرۇلمىغا ئايلىنىش ۋە ھىدروگېل ھاسىل قىلىش ئىقتىدارى spidroin نىڭ NT ساھەلىرىنىڭ بەزىلىرىگە ماس كېلىدىغاندەك قىلىدۇ.ئوخشىمىغان يىپەك تۈرى ۋە ئۆمۈچۈك تۈرىدىكى NT لار ، Trichonephila clavipes (NTFlSp) گەرچە مېتونىن مىقدارى بىر قەدەر تۆۋەن ۋە ئىسسىقلىق مۇقىملىقى يۇقىرى بولسىمۇ گېلى ھاسىل قىلغان (5e رەسىم ، f ۋە قوشۇمچە 2-جەدۋەل).بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا ، ئارېنۇس شامالدارىش (NTMiSp) دىن كەلگەن كىچىك ئامپۇللار ئاقسىل سىپروئىندىن NT تۆۋەن ئىسسىقلىق مۇقىملىقى ۋە مېتونىن مىقدارى يۇقىرى ھىدروگېل ھاسىل قىلمىدى (قوشۇمچە جەدۋەل 2 ۋە رەسىم 5e ، f).كېيىنكىسى بەلكىم ئومۇرتقا ئارىلىقتىكى دېسففىدلىق زايومنىڭ بولۇشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇشى مۇمكىن.ئىزچىل ھالدا ، NTMiSp نىڭ دېسففىدلىق زايومى تۆۋەنلىگەندە ، ° C 37 قا چىققاندىن كېيىن 10 مىنۇت تۇرغاندا ھىدروگېل ھاسىل قىلدى (5e رەسىم).خۇلاسىلىگەندە ، شۇنىڭغا دىققەت قىلىش كېرەككى ، قۇرۇلما ئەۋرىشىملىكى NT دىن گېلى ھاسىل قىلىشنىڭ مۇھىم ، ئەمما بىردىنبىر ئەمەس.مۇناسىۋەتلىك بولۇشى مۇمكىن بولغان يەنە بىر ئامىل ئامىلوئىد تالاسىنى شەكىللەندۈرۈش خاھىشى بولۇپ ، سىيرىلما سانلىق مەلۇمات ئامبىرى ۋە ۋالتز ئالگورىزىم بىلەن تەھلىل قىلىش ئارقىلىق گېلى ھاسىل قىلىش ئىقتىدارى بىلەن ئامىلوئىدوگېنلىق رايوننىڭ مەۋجۇتلۇقى ، شۇنداقلا ئالدىن پەرەز قىلىنغان رايونلارنىڭ باغلىنىشى بارلىقىنى كۆرسىتىپ بەردى. تۇراقلىق سىيرىلما ھاسىل قىلىش.بۇ يەردە باغلىنىش بار (قوشۇمچە 2-جەدۋەل ۋە قوشۇمچە 9-رەسىم).
NT نىڭ پايدىلىق شارائىتتا تالا ھاسىل قىلىش ۋە گېلى ھاسىل قىلىش ئىقتىدارى بىزنى باشقا ئاقسىل پارچىلىرى بىلەن NT بىرىكمىسىنىڭ يەنىلا بىرىكىش شېرىكلىرىنىڭ تولۇق ئىقتىدارى بىلەن گېلى ھاسىل قىلالايدىغانلىقىنى قىياس قىلىشقا يېتەكلىدى.بۇنى سىناق قىلىش ئۈچۈن ، بىز NT نىڭ C تېرمىنالىدا ئايرىم-ئايرىم ھالدا يېشىل فلۇئورېسسېنسىيە ئاقسىلى (GFP) ۋە پۇرىن يادروسى فوسفورازا (PNP) نى تونۇشتۇردۇق.ھاسىل بولغان بىرىكتۈرۈش ئاقسىلى E. coli دا ئىپادىلەنگەنگە ماس كېلىدىغان ئەڭ يۇقىرى مەھسۇلات (150 mg / L ۋە 256 mg / L لىك تەۋرىنىش پلاستىنكىسى مەدەنىيىتى) بىلەن ئىپادىلەنگەن. باشقا ئاقسىللار ئۈچۈن NT Ref غا بىرىكتۈرۈلگەن.30. ئۇنىڭ NT-GFP (300mg / mL) ۋە His-NT-PNP (100mg / mL) بىرىكتۈرۈلگەن ئاقسىل 37 سېلسىيە گرادۇستا 2 سائەت 6.5 سائەتتىن كېيىن گېلى ھاسىل قىلغان ، مۇھىمى ، GFP قىسمى ئۆزگەرمىگەن.ھايۋانات يىلىمىدىن كېيىن كۆزىتىلگەن ، دەسلەپكى فتور فېرمېنسىيىلىك كۈچلۈكلۈكنىڭ% 70 ى يېتىلگەندىن كېيىن قالغان (6a رەسىم).ئۇنىڭ NT-PNP ھەل قىلىش چارىسى ۋە گېلىدىكى PNP پائالىيىتىنى ئۆلچەش ئۈچۈن ، بىز بىرىكمە ئاقسىلنى NT بىلەن سۇيۇلدۇرۇشقا مەجبۇر بولدۇق ، چۈنكى ساپ تەييارلىقنىڭ فېرمېنتلىق پائالىيىتى گېلى قويۇقلۇقىدىكى تەكشۈرۈشنىڭ بايقاش دائىرىسى سىرتىدا ئىدى.تەركىبىدە 0.01 mg / mL His-NT-PNP ۋە 100 mg / mL NT ئارىلاشتۇرۇلغان ئارىلاشما ماددىلار دەسلەپكى قەدەمدە ئەۋرىشكە ئېلىنغان دەسلەپكى ئېنزىم ئاكتىپلىقىنىڭ% 65 نى ساقلاپ قالغان (6b رەسىم).ئۆلچەش جەريانىدا گېلى مۇكەممەل ساقلانغان (قوشۇمچە 10-رەسىم).
ئۇنىڭ NT-GFP (300 mg / mL) غىدىقلىنىشنىڭ ئالدى-كەينىدىكى نىسپىي فلۇئورېسسېنسىيەنىڭ كۈچلۈكلۈكى ۋە كۆرۈنەرلىك ۋە ئۇلترا بىنەپشە نۇر ئاستىدا ئۇنىڭ NT-GFP ھىدروگېل (300 mg / mL) بولغان تەتۈر قاچا.نۇقتىلار يەككە ئۆلچەمنى كۆرسىتىدۇ (n = 3) ، خاتالىق بالدىقى ئۆلچەملىك ياتلىشىشنى كۆرسىتىدۇ.ئوتتۇرىچە قىممەت خاتالىق بالدىقىنىڭ مەركىزىدە كۆرسىتىلىدۇ.b PNP پائالىيىتى فتورومېتىرلىق ئانالىز ئارقىلىق NT (100 mg / ml) دىن تەركىب تاپقان ئېرىتمە ۋە گېلى ۋە ئۇنىڭ تەركىبىدە 0.01 mg / ml ئۇنىڭ NT-PNP ۋە 100 mg / ml يېڭى تەيۋەن دوللىرىدىن تەركىب تاپقان.بۇ قىستۇرما ئۇنىڭ ئىچىدە NT-PNP (5 مىللىمېتىرلىق بالداق) بار ھىدروگېل بار تەتۈر قاچا كۆرسىتىلدى.
بۇ يەردە ، بىز 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق ئاقسىل ئېرىتمىسىنى سىڭدۈرۈش ئارقىلىق NT ۋە باشقا قايتا ھاسىل بولىدىغان سپروئىن ئاقسىلىدىن ھىدروگېلنىڭ شەكىللەنگەنلىكىنى دوكلات قىلىمىز (1-رەسىم).بىز ئايلىنىشنىڭ α- خېلېسنىڭ β قەۋىتىگە ئايلىنىشى ۋە ئامىلوئىدقا ئوخشاش تالانىڭ شەكىللىنىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىمىز (3 ۋە 4-رەسىم).بۇ بايقاش كىشىنى ھەيران قالدۇرىدۇ ، چۈنكى NT لار يەر شارىدىكى بەش خېلىكلىق بولاق بىلەن بىرىكتۈرۈلگەن بولۇپ ، ئۇلارنىڭ ئېرىشچانلىقى ئىنتايىن يۇقىرى ، قويۇقلۇقى 200 مىللىگىرام / 200 سېلسىيە گرادۇس.بۇنىڭدىن باشقا ، NT لار µM دىكى تۆۋەن ئاقسىل قويۇقلۇقىدا ئىسسىقلىق تۆۋەنلىگەندىن كېيىن ئاسانلا ئەسلىگە كېلىدۇ.بىزنىڭ نەتىجىمىزگە ئاساسلانغاندا ، تالنىڭ شەكىللىنىشى> 10 mg / mL ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقى ۋە ئازراق يۇقىرى كۆتۈرۈلگەن تېمپېراتۇرىنى بىرلەشتۈرۈشنى تەلەپ قىلىدۇ (1-رەسىم).بۇ ئامىلوئىد تالاسىنىڭ فىزىئولوگىيىلىك شارائىتتىكى ئىسسىقلىق ئۆزگىرىشى سەۋەبىدىن قىسمەن ئېچىلمىغان ھالەتتە يەر شارى قاتلانغان ئاقسىلدىن ھاسىل بولىدىغانلىقى توغرىسىدىكى قاراش بىلەن بىردەك.بۇ ئۆزگىرىشنى باشتىن كەچۈرگەن ئاقسىلنىڭ مىسالى ئىنسۇلىن 49،50 ، β2 مىكروبلوبىن ، ترانسىتېتىرىن ۋە لىزوزىم 51،52،53.گەرچە NT ئانا يۇرتىدىكى α-helix بولسىمۇ ، ئەمما تەخمىنەن% 65 پولى پېپتىد زەنجىرسىمان سىيرىلما شەكىل ھاسىل قىلىشقا ماس كېلىدۇ (4e رەسىم) 45.مونومېر ھەرىكەتچان ھەرىكەتچان بولغاچقا ، ئۇ ئوتتۇراھال يۇقىرى تېمپېراتۇرىدا ۋە يۇقىرى ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقىدا بۇ خىل ئامىلوئىدوگېنلىق رايونلارنى ئاشكارىلايدۇ.بۇ خىل قاراشتىن كېيىن ، بىز سىپرودروئىننىڭ قويۇقلۇقى ۋە گۈڭگۈرتلىنىش ۋاقتى ئارىسىدىكى پاسسىپ ماسلىشىشنى بايقىدۇق (1c رەسىم) ، ئەگەر مونومون NT نىڭ ئۆزگىرىشى ياكى ئۆزگىرىش (NT * ، His-NT-L6) ياكى تۇز قوشۇش ئارقىلىق مۇقىملاشتۇرۇلسا ، بۇنىڭ ئالدىنى ئالغىلى بولىدۇ. شەكىللىنىش ھىدروگېل (5-رەسىم).
كۆپىنچە ئەھۋاللاردا ، ئامىلوئىد تالالىرى چۆكمە سۈپىتىدە ئېرىتمىسىدىن غايىب بولىدۇ ، ئەمما بەزى شارائىتتا ئۇلار ھىدروگېل 555،56،57 ھاسىل قىلىدۇ.گىدروگېل ھاسىل قىلىدىغان تالا ئادەتتە يۇقىرى تەرەپ نىسبىتىگە ئىگە بولۇپ ، مولېكۇلا قېتىشىش ئارقىلىق مۇقىم ئۈچ ئۆلچەملىك تورنى شەكىللەندۈرىدۇ ، 55،58 بىزنىڭ نەتىجىمىز بىلەن بىردەك.ۋىرۇستا ھىدروگېلنىڭ شەكىللىنىشى ئۈچۈن ، ئاقسىل كۆپىنچە تولۇق ياكى قىسمەن ئېچىلىدۇ ، مەسىلەن ، ئورگانىك ئېرىتكۈچى ، يۇقىرى تېمپېراتۇرا (70 ~ 90 سېلسىيە گرادۇس) ۋە ياكى تۆۋەن pH (1.5-3.0) 59،60،61،62.بۇ يەردە تەسۋىرلەنگەن ئۆمۈچۈك ھىدروگېل قاتتىق پىششىقلاپ ئىشلەشنى تەلەپ قىلمايدۇ ، شۇنداقلا گىدروگېلنى مۇقىملاشتۇرۇش ئۈچۈن ئۆز-ئارا ئۇلىنىش دورىسى تەلەپ قىلمايدۇ.
بۇنىڭدىن ئىلگىرى خەۋەر قىلىنىشىچە ، يىپەك ئايلىنىش جەريانىدا β جەدۋەل ئالماشتۇرۇلغاندەك كۆرۈنىدىغان سىپىروئىننىڭ تەكرارلىنىشى ۋە QD لار ھىدروگېن ھاسىل قىلىدۇ.بىزنىڭ تەتقىقاتىمىزغا سېلىشتۇرغاندا ، يوشۇرۇن دەۋرى ۋە / ياكى يوشۇرۇن تېمپېراتۇرىسى ئايرىم-ئايرىم ھالدا ئۇزۇن ياكى يۇقىرى بولۇپ ، بۇنىڭدىن كېلىپ چىققان ھىدروگېن دائىم ئوچۇق ئىدى (7-رەسىم ۋە قوشۇمچە جەدۋەل 1) 37 ، 38 ، 63 ، 64 ، 65 ، 66 ، 67 ، 68 . ) ۋە كوللاگېن.(0.6%) (7-رەسىم ۋە قوشۇمچە جەدۋەل 1 ۋە 3)
بۇ تەتقىقاتتىكى ھىدروگېلنىڭ گېلى ۋاقتى ۋە ئېلاستىك مودۇلى باشقا سىپروئىننى ئاساس قىلغان ھىدروگېن ۋە تاللانغان تەبىئىي ھىدروگېن بىلەن سېلىشتۇرۇلدى.پايدىلىنىش شارائىتىنىڭ چۈشەندۈرۈشى بىلەن بىللە پايدىلانما بېرىلگەن.APS ئاممونىي سۇلفات ، ئۆينىڭ تېمپېراتۇرىسى.37 ، 38 ، 39 ، 64 ، 65 ، 66 ، 67 ، 68 ، 69 ، 70 ، 71 ، 72 ، 73 ، 74.
ئۆمۈچۈكلەر ساقلاش جەريانىدا ئۆمۈچۈكنىڭ قېتىپ قېلىشىنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۇسۇللىرىنى ئىجاد قىلغاندەك قىلىدۇ.يىپەك بېزىدە ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقى يۇقىرى بولسىمۇ ، تېرمىنال دائىرىسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك چوڭ تەكرارلىنىش رايونى بۇ تەتقىقاتنىڭ چېگراسىدا NT ۋە CT نىڭ بەزدىكى قويۇقلۇقىنىڭ تەخمىنەن 10 ~ 20 مىللىگىرامغا توغرا كېلىدىغانلىقىدىن دېرەك بېرىدۇ.in vitro in hydrogel formation.ئۇنىڭدىن باشقا ، ئوخشاش تۇزلارنىڭ قويۇقلۇقى يىپەك بەزگە ئوخشاش NT نى مۇقىملاشتۇردى (5b رەسىم).NT نىڭ ئۆزگىرىشى E. coli سىتوسولدا تەتقىق قىلىنغان بولۇپ ، ۋىرۇستا تەكشۈرۈلگەنگە قارىغاندا تېخىمۇ چىڭ قاتلىنىدىغانلىقى بايقالغان ، بۇ تۇز ياكى باشقا ئامىللارنىڭ ئۇنىڭ vivo دا يىغىلىشىنىڭ ئالدىنى ئالىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.قانداقلا بولمىسۇن ، NT لارنىڭ ۋاراق تالاغا ئايلىنىش ئىقتىدارى ئىنچىكە شەكىللىنىشتە مۇھىم بولۇشى مۇمكىن ، كەلگۈسىدىكى تەتقىقاتلاردا تەكشۈرۈلۈشى كېرەك.
بۇ تەتقىقاتتا كۆزىتىلگەن NT- ئامىلوئىدقا ئوخشاش تالا ۋە ھىدروگېلنىڭ شەكىللىنىشىنىڭ رومان تەرەپلىرىدىن باشقا ، بىز يەنە بۇ ھادىسىنىڭ بىئوتېخنىكا ۋە بىئولوگىيىلىك داۋالاشنىڭ بولۇشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىمىز (8-رەسىم).ئۇقۇمنىڭ ئىسپاتى سۈپىتىدە ، بىز NT نى GFP ياكى PNP بىلەن بىرلەشتۈردۇق ھەمدە بىرىكتۈرۈلگەن ئاقسىلنىڭمۇ ° C 37 قا چىققان ۋاقىتتا ھىدروگېن ھاسىل قىلىدىغانلىقىنى ۋە GFP ۋە PNP بۆلەكلىرىنىڭ گېنىدىن كېيىن پائالىيىتىنى ساقلاپ قالىدىغانلىقىنى كۆرسەتتۇق (6-رەسىم).نۇكلېئوسىد فوسفورالاسى يادرونىڭ ئوخشىشىدىكى مۇھىم كاتالىزاتور بىرىكمىسى 75 ، بۇ بىزنىڭ بايقىشىمىزنى بىئولوگىيىلىك دورا سانائىتىگە مۇناسىۋەتلىك قىلىدۇ.پايدىلىق شارائىتتا سۈزۈك ھىدروگېننى شەكىللەندۈرىدىغان بىرىكمە ئاقسىلنى ئىپادىلەش ئۇقۇمى فېرمېنتنىڭ ھەرىكەتلىنىشى ، كونترول قىلىنىدىغان دورا قويۇپ بېرىش ۋە توقۇلما قۇرۇلۇشى قاتارلىق كۆپ خىل قوللىنىشچان پروگراممىلارغا پايدىلىق خۇسۇسىيەتكە ئىگە ئىقتىدارلىق ھىدروگېن ھاسىل قىلىشقا يول قويىدۇ.بۇنىڭدىن باشقا ، NT ۋە NT * ئۈنۈملۈك ئىپادىلەش بەلگىسى 30 ، يەنى NT ۋە ئۇنىڭ ۋارىيانتلىرىنىڭ ئېرىشچان بىرىكتۈرۈش ئاقسىلىنى يۇقىرى ئۈنۈملۈك ئىشلەپچىقىرىش ۋە 3D ھىدروگېلدا ھەرىكەتسىز نىشان ئاقسىلى ھاسىل قىلىشقا ئىشلىتىشكە بولىدىغانلىقىدىن دېرەك بېرىدۇ.
NT ئېرىيدۇ ، α- خىلىتلىق ۋە تۆۋەن قويۇقلۇقتا (µM) ۋە 37 ° C.ئوخشاش تېمپېراتۇرىدا ، ئەمما قويۇقلۇقى ئېشىپ كەتكەندە (> 10 mg / ml) ، NT ئامىلوئىدقا ئوخشاش تالادىن تەركىب تاپقان گېلىنى ھاسىل قىلىدۇ.NT بىرىكتۈرۈش ئاقسىلى يەنە تولۇق ئىقتىدارلىق بىرىكتۈرۈش پارچىلىرى بىلەن تالالىق گېلى ھاسىل قىلىپ ، NT ئارقىلىق ھەر خىل ئاقسىللارنىڭ 3D ھىدروگېندا ھەرىكەتلىنىشىگە يول قويىدۇ.ئاستى: NT (PDB: 4FBS) ۋە تالا تورى ۋە مۇناسىۋەتلىك ئاقسىل قۇرۇلمىلىرىنىڭ تەسۋىرلىرى (پەرەز قىلىنغان ۋە كۆلەمگە تارتىلمىغان ، GFP PDB: 2B3Q ، 10.2210 / pdb2B3Q / pdb; PNP PDB: 4RJ2, 10.2210 / pdb4RJ2 / pdb).
قۇرۇلۇشلار (ئامىنو كىسلاتا تەرتىپىنى ئۆز ئىچىگە ئالغان تولۇق تىزىملىكنىڭ قوشۇمچە 4-جەدۋىلىگە قاراڭ) پىلازما pT7 غا كلونلانغان ۋە E. coli BL21 (DE3) غا ئۆزگەرتىلگەن.E. coli ئىنژېنېرلىق پىلازمىسى بار لۇرىيا شورپىسىغا ئوكۇل قىلىنغان بولۇپ ، قانامېكىن (70 mg / l) تولۇقلانغان ۋە بىر كېچە 30 سېلسىيە گرادۇس ۋە 250pm.ئاندىن بۇ مەدەنىيەتتە قانامېچىن بار LB ۋاستىسىگە 1/100 ئوكۇل قىلىنغان ۋە 30 ° C ۋە 110 rpm دە مەدەنىيەتلەشتۈرۈلگەن ، تاكى OD600 0.8 گە يەتكەنگە قەدەر.NMR تەتقىقاتى ئۈچۈن ، باكتېرىيە M9 ئەڭ تۆۋەن مىقداردا 2 گرام D- گلۇكوزا 13C (ئالدرىچ) ۋە 1 گرام ئاممونىي خىلور 15N (كامبىرىج ئىزوتوپ تەجرىبىخانىسى ، Inc.) بار بولۇپ ، ئىزوتوپ بىلەن ئاقسىل بەلگىسى بار.تېمپېراتۇرىنى 20 سېلسىيە گرادۇسقا چۈشۈرۈپ ، 0.15 mM ئىزوپروپىلتىئوگالاكتوپىرانوسىد (ئاخىرقى قويۇقلۇقى) بىلەن ئاقسىلنىڭ ئىپادىلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.بىر كېچە ئاقسىل ئىپادىلەنگەندىن كېيىن ، ھۈجەيرىلەر 7278 × g ، ° C4 20 مىنۇتتا يىغىۋېلىندى.ھۈجەيرە پېلەكلىرى 20 mM Tris-HCl ، pH 8 دە توختىتىلدى ۋە داۋاملىق ئىشلىتىلدى.ئېرىتىلگەن ھۈجەيرىلەر 30 kPa دە ھۈجەيرە قالايمىقانلاشتۇرغۇچ (TS يۈرۈشلۈك ماشىنىسى ، Constant Systems Limited ، ئەنگىلىيە) ئارقىلىق لايلانغان.ئاندىن كېيىن لىزا 25 سېلسىيە گرادۇستا 30 سېلسىيە گرادۇستا 30 مىنۇت مەركەزلەشتۈرۈلدى.NTMiSp غا نىسبەتەن ، بۇ پېلەك 2 M ئۇرېيە ، 20 mM Tris-HCl ، pH 8 دە ئەسلىگە كەلتۈرۈلۈپ ، 2 مىنۇت (2 s on / off ،% 65) ، ئاندىن 25000 xg ، 4 سېلسىيە گرادۇس ئىچىدە قايتا مەركەزلەشتۈرۈلدى. 30 مىنۇت.خاسىيەتلىك ماددا Ni-NTA تۈۋرۈكىگە قاچىلانغان ، 20 mM Tris-HCl ، 2 mM imidazole ، pH 8 بىلەن يۇيۇلغان ، ئاخىرىدا ئاقسىل 20 mM Tris-HCl ، 200 mM imidazole ، pH 8. بىلەن چىقىرىلىپ ، NT2RepCT ھاسىل قىلىش ۋە NTCT ، ترومبىن ھەزىم قىلىش تور بېكىتى (ThrCleav) نى ئۆزىنىڭ NT بىلەن تونۇشتۇرىدۇ.Thrombin تازىلاش تور بېكەتلىرى ئۇنىڭ NT-ThrCleav-2Rep (2Rep ئىشلەپ چىقىرىدۇ) ، ئۇنىڭ تىئورېدوكسىن- ThrCleav-NT (NT ئىشلەپچىقىرىدۇ) ، ئۇنىڭ تىئورېدوكسىن- ThrCleav-CT (CT ئىشلەپچىقىرىدۇ) ، His-Thioredoxin-ThrCleav-NT قاتارلىقلاردىمۇ بار. .*.بۇ قۇرۇلۇشلار ترومبىن (1: 1000) بىلەن ھەزىم قىلىنغان ۋە بىر كېچىدىلا 4 سېلسىيە گرادۇستا 20MM Tris-HCl ، pH 8 بىلەن دىئالىزلانغان ، مولېكۇلا ئېغىرلىقى 6-8 kDa بولغان Spectra / Por دىئالىز پەردىسى ئىشلىتىلگەن.دىئالىزلانغاندىن كېيىن ، ھەل قىلىش چارىسى Ni-NTA تۈۋرۈكىگە قاچىلانغان بولۇپ ، تەركىبىدە ئاقسىل بار بولغان ئېقىنلار توپلىنىدۇ.ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقى ھەر بىر ئاقسىلنىڭ يوقىلىش كوئېففىتسېنتى ئارقىلىق ئۇلترا بىنەپشە نۇرنىڭ سۈمۈرۈلۈشىنى 280 nm ئۆلچەش ئارقىلىق بېكىتىلدى ، NTF1Sp نى ھېسابقا ئالمىغاندا ، ئىشلەپچىقارغۇچىلارنىڭ كېلىشىمنامىسىگە ئاساسەن بىرادفورد تەكشۈرۈشىنى ئىشلەتكەن.ساپلىق دەرىجىسى SDS پولىئاكرىلامىد (% 4 ~% 20) گېلى ئېلېكتروفورىسى ۋە Coomassie پارقىراق كۆك داغ تەرىپىدىن بەلگىلىنىدۇ.ئاقسىل مەركەزلىك سۈزگۈچ (VivaSpin 20 ، GE ساقلىقنى ساقلاش) ئارقىلىق 4000 xg بولۇپ ، 20 مىنۇتلۇق ئايلىنىشتا 10 kDa مولېكۇلا ئېغىرلىقى تۆۋەنلىگەن.
ئاقسىل ئېرىتمىسىنى ئېرىتىپ ، 150 مىللىلېتىرنى 1 مىللىمېتىر سۈزۈك قاپارتما قاچىسىغا (8 x 40 مىللىمېتىرلىق تېرمو ئىلمى) ئارىلاشتۇرۇڭ.نەيچىلەر تۇتۇلۇپ پارفىلم بىلەن پېچەتلىنىپ ، پارلىنىشنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ.ئەۋرىشكەلەر (n = 3) 37 سېلسىيە گرادۇس ياكى 60 سېلسىيە گرادۇستا سىڭدۈرۈلۈپ ، قەرەللىك ھالدا تەتۈر يۆنىلىشتە ئۆزگىرىپ كۆزىتىلىدۇ.گېلى بولمىغان ئەۋرىشكەلەر كەم دېگەندە بىر ھەپتە سىڭدۈرۈلگەن.ھەر 10 µM ئاقسىلغا 10MM DTT بولغان NTMiSp دېسففىدلىق زايومنى ئازايتىڭ.تەبىئىي ئۆمۈچۈك يىپەكنىڭ يېپىشقاقلىقىنى تەھلىل قىلىش ئۈچۈن ، شىۋىتسىيە كۆۋرۈك ئۆمۈچۈكى كېسىۋېتىلدى ، ئىككى ئاساسلىق ئامپۇللانغان بەز 20 مىللىمېتىر Tris-HCl بۇففېر pH 8 نىڭ 200 مىللىمېتىرغا قويۇلدى ۋە كېسىلىپ ، سىرنىڭ بەزدىن ئايرىلىشىغا رۇخسەت قىلىندى..بەزنىڭ مەزمۇنى بۇففېردا ئېرىپ ، قۇرۇق ئېغىرلىقنى ئېنىقلاش ئۈچۈن 50 µl (ئوچۇق قاچا-قۇچىلارنى 60 سېلسىيە گرادۇسلۇق تۇراقلىق ھالەتتە) ، 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق ئىسسىقلىق تارقىتىشتا 150 µ.
ئۆلچەش گېئومېتىرىيىسى / قورالى پاراللېل تاختايدىن ياسالغان بولۇپ ، دىئامېتىرى 20 مىللىمېتىر ، پەرقى 0.5 مىللىمېتىر.ئەۋرىشكىنى 25 سېلسىيە گرادۇستىن 45 سېلسىيە گرادۇسقىچە قىزىتىپ ، مىنۇتىغا 1 سېلسىيە گرادۇسلۇق سۈرئەت بىلەن ° C25 قا قايتىڭ.تەۋرىنىشنى ئۆلچەش 0.1 Hz چاستوتا ۋە ماتېرىيالنىڭ تۈز سىزىقلىق يېپىشقاقلىق رايونىدا ئايرىم-ئايرىم ھالدا 100 mg / mL ۋە 300-500 mg / mL ئەۋرىشكىسى ئۈچۈن% 5 ۋە% 0.5 لىك بېسىم بىلەن ئېلىپ بېرىلدى.پارغا ئايلىنىشنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن ، نەملىك ساقلاش ئۆيىنى ئىشلىتىڭ.Prism 9 ئارقىلىق سانلىق مەلۇماتلار ئانالىز قىلىندى.
ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا ئىنفرا قىزىل نۇر (IR) سپېكترىنى يىغىش ئۈچۈن 800 دىن 3900 سانتىمېتىرغىچە.ATR ئۈسكۈنىسى ، شۇنداقلا سپېكترومېتىر ئارقىلىق نۇر يولى سىناقتىن ئىلگىرى ۋە سىناق جەريانىدا قۇرۇق سۈزۈلگەن ھاۋا بىلەن ساپلىنىدۇ.سپېكترىدىكى سۇنىڭ سۈمۈرۈلۈش چوققىسىنى ئەڭ تۆۋەن چەككە چۈشۈرۈش ئۈچۈن 500 مىللىگىرام ئېرىتمىسى كىرىستالغا يەتكۈزۈلۈپ ، ئۆلچەشتىن ئىلگىرى گېلى (500 mg / mL) ھاسىل قىلىنغاندىن كېيىن كىرىستالغا يۆتكەلگەن (n = 3).1000 سىكانىرلاش ئېنىقلىق دەرىجىسى 2 cm-1 ۋە نۆل ۋەزىپە دەۋرىيلىكى 2. خاتىرىلەندى. ئىككىنچى تۇغۇندى OPUS (Bruker) ئارقىلىق توققۇز نومۇرنى راۋانلاشتۇرۇش دائىرىسى ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ.سپېكترا F. Menges «Spectragryph - ئوپتىكىلىق سپېكتروسكوپ يۇمشاق دېتالى» ئارقىلىق 1720 دىن 1580 سانتىمېتىرغىچە بولغان بىر گەۋدىلىشىش رايونىغا نورماللاشتى.ATR-IR سپېكتروسكوپىدا ، ئىنفىرا قىزىل نۇرنىڭ ئەۋرىشكە ئىچىگە سىڭىپ كىرىش چوڭقۇرلۇقى دولقۇنغا تايىنىدۇ ، نەتىجىدە تۆۋەن دولقۇن دولقۇنىنىڭ سۈمۈرۈلۈشى يۇقىرى دولقۇنغا قارىغاندا كۈچلۈك بولىدۇ.ئەنجۈردە كۆرسىتىلگەن سپېكترا ئۈچۈن بۇ ئۈنۈملەر تۈزىتىلمىدى.3 چۈنكى ئۇلار ئىنتايىن كىچىك (قوشۇمچە 4-رەسىم).بۇ رەسىمنىڭ تۈزىتىلگەن سپېكترى Bruker OPUS يۇمشاق دېتالى ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ.
پىرىنسىپ جەھەتتىن ، I چوققىسى ئىچىدىكى زاپچاسلارنىڭ ئىشەنچلىك يېشىشتىن كېيىن ئاقسىلنىڭ ماسلىشىشچانلىقىنى ئەتراپلىق مىقدارلاشتۇرۇش مۇمكىن.قانداقلا بولمىسۇن ، بەزى توسالغۇلار ئەمەلىيەتتە پەيدا بولىدۇ.سپېكترىدىكى شاۋقۇن يېشىش جەريانىدا (يالغان) چوققادەك كۆرۈنىدۇ.ئۇنىڭدىن باشقا ، سۇنىڭ ئېگىلىشىدىن كېلىپ چىققان چوققا مەن چوققىنىڭ ئارىلىقى بىلەن ماس كېلىدۇ ھەمدە بۇ يەردە تەتقىق قىلىنغان سۇ گېلى قاتارلىق كۆپ مىقداردا سۇ بار ئەۋرىشكەلەرگە ئوخشاش چوڭلۇقتا بولۇشى مۇمكىن.شۇڭلاشقا ، بىز I چوققىسى ئارىلىقىدا پۈتۈنلەي پارچىلىنىشقا ئۇرۇنمىدۇق ، بىزنىڭ كۆزىتىشىمىزنى پەقەت NMR سپېكتروسكوپقا ئوخشاش باشقا ئۇسۇللارنى قوللاپ ئويلىشىش كېرەك.
50 mg / ml NT ۋە His-NT2RepCT نىڭ ئېرىتمىسى بىر كېچىدىلا 37 سېلسىيە گرادۇستا يېلىندى.ھىدروگېل ئاندىن 20 mM Tris-HCl (pH 8) بىلەن سۇيۇلدۇرۇلۇپ ، قويۇقلۇقى 12.5 mg / ml ، قۇدۇقنى سىلكىپ ، تۇرۇبا ئارقىلىق گېلىنى سۇندۇردى.كېيىنكى قەدەمدە ، ھىدروگېل 20 mM Tris-HCl (pH 8) بىلەن 10 قېتىم سۇيۇلدى ، 5 مىللىمېتىر ئەۋرىشكە فورما بىلەن سىرلانغان مىس تورغا سۈرۈلۈپ ، ئارتۇق ئەۋرىشكە قەغەز بىلەن ئېلىۋېتىلدى.ئەۋرىشكەلەر 5 µl MilliQ سۈيى بىلەن ئىككى قېتىم يۇيۇلۇپ ،% 1 لىك ئۇران بىلەن 5 مىنۇت بويالغان.سۈمۈرگۈچ قەغەز بىلەن ئارتۇق داغنى ئېلىڭ ، ئاندىن تورنى قۇرۇتۇڭ.بۇ تورلاردا 100 كىلوۋولتلۇق FEI Tecnai 12 Spirit BioTWIN ئارقىلىق تەسۋىر ھاسىل قىلىنغان.بۇ سۈرەتلەر Veleta 2k × 2k CCD كامېراسى (Olympus Soft Imaging Solutions ، GmbH ، Münster ، گېرمانىيە) ئارقىلىق x 26 مىڭ 500 ۋە x 43000 چوڭايتىلغان.ھەر بىر ئەۋرىشكە (n = 1) ئۈچۈن 10-15 پارچە رەسىم خاتىرىلەندى.ImageJ (https://imagej.nih.gov/) رەسىم ئانالىزى ۋە تالا دىئامېتىرىنى ئۆلچەشتە ئىشلىتىلگەن (n = 100 ، ئوخشىمىغان تالا).Prism 9 جۈپلەشتۈرۈلمىگەن T سىناق (ئىككى قۇيرۇق) ئىشلەشكە ئىشلىتىلگەن.His-NT2RepCT ۋە NT تالاسىنىڭ ئوتتۇرىچە قىممىتى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 11.43 (SD 2.035) ۋە 7.67 (SD 1.389) nm.ئىشەنچ ئارىلىقى (% 95) -4.246 دىن -3.275.ئەركىنلىك دەرىجىسى = 198 ، p <0.0001.
تەركىبىدە 10 µM تىيوفلاۋىن T (ThT) بولغان 80 µl سۇيۇقلۇق ئەۋرىشكىسى Corning 96 قۇدۇق قارا ئاستى سۈزۈك ئاستى تاختاينى ئىشلىتىپ تۇراقلىق شارائىتتا ئۈچ ھەسسە (n = 3) ئۆلچەم قىلىندى.فلۇئورېسسېنسىيە پەرقى 440 nm ھاياجانلىنىش سۈزگۈچ ۋە 480 nm بۇلغىما قويۇپ بېرىش سۈزگۈچ (گېرمانىيە Offenburg ، BMG Labtech دىن FLUOStar Galaxy) ئارقىلىق خاتىرىلەنگەن.ThT سىگىنالى تويۇنمىغان ھەم ئۆچمىگەن ، چۈنكى ThT نىڭ ئوخشىمىغان قويۇقلۇقى بىلەن تەجرىبە سىگنالنىڭ كۈچلۈكلۈك دەرىجىسىنى ئۆزگەرتمەي ئېلىپ بېرىلغان.تۇماننى ئۆلچەش ئۈچۈن 360 nm دىكى سۈمۈرۈلۈش خاتىرىسىنى خاتىرىلەڭ.ئۇرۇق سېلىش تەجرىبىسى ئۈچۈن ، 100 سېلسىيە گرادۇستا 100 mg / mL گېلى شەكىللىنىپ ، توختىتىلدى ۋە% 5 ،% 10 ۋە% 20 لىك موللاق نىسبىتىدە ئۇرۇق سېلىشقا ئىشلىتىلدى.Prism 9 ئارقىلىق سانلىق مەلۇماتلار ئانالىز قىلىندى.
His-NT2RepCT ۋە NT> 100 mg / mL نىڭ مۇز زاپىسى ۋە 0.22 µm سۈزگۈچ ئارقىلىق سۈزۈڭ.قويۇقلۇقى نانودروپ ئارقىلىق 280 nm دىكى سۈمۈرۈلۈشنى ئۆلچەش ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ.96 قۇدۇقتىكى قارا باغلانمايدىغان تەخسە (Corning) قۇدۇقلىرىدا ئەۋرىشكە 20 mM Tris-HCl pH 8 دە 20 mg / ml غا سۇيۇلدى ۋە 5 μM ThT (ئاخىرقى قويۇقلۇقى) ئارىلاشتۇرۇلدى ، ئومۇمىي ئەۋرىشكە قويۇقلۇقى 50 μl volume.ئەۋرىشكە ھەر 10 مىنۇتتا 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق CellObserver (Zeiss) مىكروسكوپتا يەتكۈزۈلگەن نۇر قانىلى ۋە FITC ھاياجانلىنىش ۋە ThT تەسۋىر ھاسىل قىلىش ئۈچۈن قويۇپ بېرىش سۈزگۈچ توپلىمى ئارقىلىق تەسۋىرلەنگەن.تەسۋىر ھاسىل قىلىش ئۈچۈن 20x / 0.4 لىنزا ئىشلىتىلىدۇ.رەسىم ئانالىزى ئۈچۈن Zen Blue (Zeiss) ۋە ImageJ (https://imagej.nih.gov/) ئىشلىتىلگەن.گېلس يەنە NT ۋە His-NT2RepCT ئېرىتمىسىدىن 50 mg / mL قويۇقلۇقىدا 20 mM Tris pH 8 ۋە 5 µM ThT قويۇقلۇقىدا تەييارلانغان ۋە ° C 37 قا 90 مىنۇت سىڭدۈرۈلگەن.گېلى پارچىلىرى باغلانمىغان قارا 96 قۇدۇق سۈزۈك تاختايدا 20 mM Tris ، pH 8 ۋە 5 μM ThT بولغان يېڭى قۇدۇققا يۆتكەلدى.20x / 0.4 چوڭايتىشتا يېشىل فلۇئورېسسېنسىيە ۋە يورۇق مەيدان رەسىملىرىگە ئېرىشىڭ.ImageJ رەسىم ئانالىزى ئۈچۈن ئىشلىتىلگەن.
ھەل قىلىش NMR سپېكترى 310 K لىق 600MHz لىق Bruker Avance Neo سپېكترومېتىرغا QCI Quadrupole رېزونانىس ئىتتىرىشچان Gradient Field Cryoprobe (HFCN) سەپلەنگەن.NMR ئەۋرىشكىسىدە 10 mg / mL لىك ئوخشاش ئاقسىل بار ، 13C ، 15N ، 20 mM Tris-HCl (pH 8) ، 0.02% (w / v) NaN3 ، 5% DO (v / v) ، (n = 1) .PH 6.7 دىكى NT2RepCT نىڭ خىمىيىلىك يۆتكىلىشى 15N-HSQC نىڭ 2D سپېكترىدا چوققا 23 نى تەقسىملەشكە ئىشلىتىلگەن.
سېھىرلىك بۇلۇڭ ئايلانما قاتتىق NMR (MAS) سپېكترى 13C ، 15N ماركىلىق ھىدروگېل Bruker Avance III HD سپېكترومېتىرغا 800MHz لىق 3.2 مىللىمېتىر 13C / 15N {1H} ئېلېكترونسىز تەكشۈرۈش ئەسۋابى ئورنىتىلغان.ئەۋرىشكە تېمپېراتۇرىسى 277 K دىكى ئۆزگىرىشچان تېمپېراتۇرا تەبىئىي گاز ئېقىمى ئارقىلىق كونترول قىلىندى. MAS چاستوتىسى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 12.5 kHz ۋە 20 kHz بولغان ئىككى ئۆلچەملىك ئىككى قۇتۇپلۇق ئايلانما رېزونانس (DARR) 76 ۋە رادىئو چاستوتىسىنى قايتا ئۇلاش (RFDR) 77 سپېكترى سېتىۋېلىندى.1H دىن 13C غىچە بولغان قۇتۇپ قۇتۇپلىشىش (CP) 1H دە 60.0 دىن 48.0 kHz غىچە ، 13C (61.3 / 71.6 kHz) لىك سىزىقلىق رېشاتكا ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى ، ئالاقىلىشىش ۋاقتى 0.5-1 ms.سانلىق مەلۇمات توپلاش جەريانىدا 73.5 kHz لىق ئومۇرتقا 6478 يېشىش ئىشلىتىلگەن.سېتىۋېلىش ۋاقتى 10 مىللىمېتىر ، دەۋرىيلىكنىڭ كېچىكىشى 2.5 سېكۇنت.RFDR سپېكترىدا كۆزىتىلگەن يەككە ئۇلانغان Cα / Cβ باغلىنىشى DARR سپېكترىدىكى قالدۇق قالدۇق تىپىدىكى خىمىيىلىك ئۆزگىرىش ۋە كۆپ باغلىنىشلىق باغلىنىشقا ئاساسەن تەقسىم قىلىنغان.
Zipper79 سانلىق مەلۇمات ئامبىرى (https://services.mbi.ucla.edu/zipperdb/) NT ، NTFlSp ۋە NTMiSp نىڭ تەۋرىنىش يۈزلىنىشى ۋە Rosetta ئېنېرگىيىسىنى باھالاشقا ئىشلىتىلگەن.Zipper سانلىق مەلۇمات ئامبىرى Rosetta Energy80 نى ھېسابلايدۇ ، ئۇ بىر نەچچە ھەقسىز ئېنېرگىيە ئىقتىدارىنى بىرلەشتۈرۈپ ئاقسىل قۇرۇلمىسىنى تەھلىل قىلىدۇ.-23 kcal / mol ياكى ئۇنىڭدىن تۆۋەن بولغان ئېنىرگىيە سەۋىيىسى تالاغا مايىللىقىنى كۆرسىتىدۇ.تۆۋەن ئېنېرگىيە سىيرىلما شەكىلدىكى ئىككى β بەلۋاغنىڭ تېخىمۇ مۇقىملىقىنى كۆرسىتىدۇ.بۇنىڭدىن باشقا ، Waltz ئالگورىزىم NT ، NTFlSp ۋە NTMiSp Ref دىكى ئامىلوئىدوگېنلىق رايونلارنى ئالدىن پەرەز قىلىشقا ئىشلىتىلگەن.81. (https://waltz.switchlab.org/).
NT ئاقسىل ئېرىتمىسى pH 5.5 ۋە 6.0 دىكى 2- (N-morpholino) ئېتانېسۇلفونىك كىسلاتا (MES) بۇففېر بىلەن ئارىلاشتۇرۇلۇپ pH نى pH 6 ۋە 7 گە تۆۋەنلەتتى.ئەڭ ئاخىرقى ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقى 100 مىللىگىرام.
J-1500 CD سپېكترى ئۆلچەش ئەسۋابىدا (ئامېرىكا JASCO ، ئامېرىكا) ئوپتىكىلىق يولى 0.1 سانتىمېتىرلىق 300 مىللىمېتىرلىق كۇۋەيت ئارقىلىق ئۆلچەش ئېلىپ بېرىلدى.ئاقسىل 20 mM فوسفاتلىق بۇففېر (pH 8) دا 10 μM (n = 1) غا سۇيۇلدى.تۇزنىڭ مەۋجۇتلۇقىدىكى ئاقسىلنىڭ مۇقىملىقىنى ئانالىز قىلىش ئۈچۈن ، ئاقسىل ئوخشاش قويۇقلۇقتا (n = 1) 20 mM فوسفاتلىق بۇففېر (pH 8) دا ئايرىم-ئايرىم ھالدا 154 mM NaF ياكى NaCl بار.تېمپېراتۇرا سىكانىرلاش 222 nm دىن 25 سېلسىيە گرادۇستىن 95 سېلسىيە گرادۇسقىچە بولغان.يەرلىك قاتلانغان ئاقسىلنىڭ نىسبىتى (KDmeasure - KDfinal) / (KDstart - KDfinal) فورمۇلا ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ.بۇنىڭدىن باشقا ، ھەر بىر ئەۋرىشكە ئۈچۈن 25 سېلسىيە گرادۇستىن 260 nm دىن 190 nm غىچە ، ° C 95 قا چىققاندىن كېيىن بەش سپېكترا خاتىرىلەنگەن.بەش سپېكترا ئوتتۇرا ھېساب بىلەن راۋانلاشتۇرۇلۇپ ، موللاق ئېللىپسقا ئايلاندۇرۇلدى.Prism 9 ئارقىلىق سانلىق مەلۇماتلار ئانالىز قىلىندى.
His-NT-GFP (300 mg / mL ، 80 µL) نىڭ فلۇئورېسسېنسىيە كۈچلۈكلىكى تۇراقلىق شارائىتتا 96 سۈزۈك كورنىن تاختىسىدا ئۈچ ھەسسە (n = 3) ئۆلچەم قىلىنغان.ئەۋرىشكە دولقۇنى فلۇئورېسسېنسىيەنى ئاساس قىلغان تەخسە ئوقۇغۇچ بىلەن ئۆلچەڭ ، ھاياجانلىنىش دولقۇنىنىڭ ئۇزۇنلۇقى 395 nm ، قويۇپ بېرىلىشتىن ئىلگىرى 509 nm ، 2 سائەتتىن كېيىن ° C 37 قا چىققان.Prism 9 بىلەن سانلىق مەلۇماتلار ئانالىز قىلىندى.
پۇرىن نۇكلېئوسىد فوسفورلازا پائالىيەت زاپچاسلىرى (فتورومېتىر ئۇسۇلى ، سىگما ئالدرىچ) ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ كۆرسەتمىسى بويىچە ئىشلىتىلگەن.گېلى ۋە ئۇنىڭ NT-PNP نى ئۆز ئىچىگە ئالغان ھەل قىلىش لايىھىسىدىكى پائالىيەتلەرنى ئۆلچەش ئۈچۈن ، ئۇنىڭ NT-PNP نىڭ 10 ng نى 100 mg / mL NT بىلەن ئومۇمىي ھەجىمى 2 µL غا ئارىلاشتۇرۇڭ ، چۈنكى گېلى بۇ گۇرۇپپىنىڭ بايقاش ئارىلىقىدىن يۇقىرى سىگنال بەردى.ئۇنىڭ- NT-PNP بولمىغان گېلى ۋە ھەل قىلىش چارىلىرىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.ئۆلچەش ئىككى قېتىم ئېلىپ بېرىلدى (n = 2).پائالىيەت ئۆلچەم قىلىنغاندىن كېيىن ، رېئاكسىيە ئارىلاشمىسى ئېلىۋېتىلدى ۋە گېلى سۈرەتكە تارتىلدى ، ئۆلچەش جەريانىدا گېلىنىڭ مۇكەممەل بولۇشىغا كاپالەتلىك قىلىندى.Prism 9 ئارقىلىق سانلىق مەلۇماتلار ئانالىز قىلىندى.
تەتقىقات لايىھىسىگە مۇناسىۋەتلىك تېخىمۇ كۆپ ئۇچۇرلارنى بۇ ماقالىگە باغلانغان تەبىئەت تەتقىقاتى قىسقىچە مەزمۇنىدىن كۆرۈڭ.
1- ۋە 2-رەسىملەر دەسلەپكى سانلىق مەلۇماتنى ئوتتۇرىغا قويدى.1c ، 2a - c ، 3a ، b ، e - g ، 4 ، 5b ، d ، f ۋە 6 ، قوشۇمچە ئەنجۈر.3 ، قوشۇمچە ئەنجۈر.5a ، d ، قوشۇمچە ئەنجۈر.6 ۋە قوشۇمچە ئەنجۈر.8. بۇ تەتقىقاتتىكى سانلىق مەلۇماتلار Zenodo سانلىق مەلۇمات ئامبىرىدا ساقلانغان https://doi.org/10.5281/zenodo.6683653.بۇ تەتقىقاتتا ئېرىشكەن NMR سانلىق مەلۇماتلىرى BMRBig ئامبىرىغا كىرىش كىملىكى bmrbig36 نىڭ ئاستىغا يوللاندى.GFP ۋە PNP نىڭ قۇرۇلمىسى PDB (GFP 2B3Q ، PNP 4RJ2) دىن ئېلىنغان.
Rising, A. and Johansson, J. Spinning سۈنئىي ئۆمۈچۈك يىپەك.National Chemical.biology.11 ، 309–315 (2015).
Babb, PL et al.نېفىلا كلاۋىپ گېنى ئۆمۈچۈك يىپەك گېنىنىڭ كۆپ خىللىقىنى ۋە ئۇلارنىڭ مۇرەككەپ ئىپادىسىنى گەۋدىلەندۈرىدۇ.National Genette.49 ، 895–903 (2017).