Nature.com نى زىيارەت قىلغىنىڭىزغا رەھمەت.سىز چەكلىك CSS قوللىشى بىلەن توركۆرگۈ نۇسخىسىنى ئىشلىتىۋاتىسىز.ئەڭ ياخشى تەجرىبە ئۈچۈن يېڭىلانغان تور كۆرگۈچنى ئىشلىتىشىڭىزنى تەۋسىيە قىلىمىز (ياكى Internet Explorer دىكى ماسلىشىشچان ھالەتنى چەكلەڭ).ئۇنىڭدىن باشقا ، داۋاملىق قوللاشقا كاپالەتلىك قىلىش ئۈچۈن ، ئۇسلۇب ۋە JavaScript بولمىغان تور بېكەتنى كۆرسىتىمىز.
تام تەسۋىردە ھەر بىر تام تەسۋىردە ئۈچ ماقالە كۆرسىتىلىدۇ.كەينى ۋە كېيىنكى كۇنۇپكىلارنى ئىشلىتىپ تام تەسۋىردىن يۆتكىڭ ياكى ئاخىرىدا تام تەسۋىر كونترول كۇنۇپكىسى ئارقىلىق ھەر بىر تام تەسۋىردىن ئۆتۈڭ.

317 داتلاشماس پولاتتىن ياسالغان تۇرۇبا بىلەن تەمىنلىگۈچىلەر

داتلاشماس پولات ماتېرىياللارنىڭ خىمىيىلىك تەركىب جەدۋىلى

SPACA6 ئىسپېرما ئارقىلىق ئىپادىلىنىدىغان يەر يۈزىدىكى ئاقسىل بولۇپ ، سۈت ئەمگۈچىلەرنىڭ جىنسىي كۆپىيىشىدە ئويۇننىڭ بىرىكىشىدە ئىنتايىن مۇھىم.گەرچە بۇ نېگىزلىك رول بولسىمۇ ، SPACA6 نىڭ كونكرېت ئىقتىدارىنى ياخشى چۈشىنىشكە بولمايدۇ.بىز ئېنىقلىق دەرىجىسى 2.2 Å بولغان SPACA6 نىڭ تاشقى ھۈجەيرە دائىرىسىنىڭ خرۇستال قۇرۇلمىسىنى ئايدىڭلاشتۇرىمىز ، تۆت بەلۋاغلىق باغلانما ۋە Ig غا ئوخشاش β ساندۋىچتىن تەركىب تاپقان ئىككى ساھەلىك ئاقسىل ئاشكارىلاندى.بۇ قۇرۇلما يەنە بىر ئويۇننىڭ بىرىكىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئاقسىل IZUMO1 غا ئوخشايدۇ ، SPACA6 ۋە IZUMO1 بۇ يەردە IST ئادەتتىن تاشقىرى ئائىلە دەپ ئاتىلىدىغان ئوغۇتقا مۇناسىۋەتلىك ئاقسىللارنىڭ ئادەتتىن تاشقىرى ئائىلىسىنىڭ قۇرغۇچى ئەزالىرىغا ئايلىنىدۇ.IST ئادەتتىن تاشقىرى جەمەت قۇرۇلمىسى ئۇنىڭ ئەگرى-توقاي تۆت خىلىتلىق باغلىنىشى ۋە بىر جۈپ دېسففىد بىلەن باغلانغان CXXC نەقىشى تەرىپىدىن قۇرۇلما جەھەتتىن ئېنىقلانغان.قۇرۇلمىنى ئاساس قىلغان AlphaFold ئىنسانلارنىڭ ئاقسىلىنى ئىزدەش ئارقىلىق بۇ ئادەتتىن تاشقىرى ئائىلىنىڭ قوشۇمچە ئاقسىل ئەزالىرىنى ئېنىقلاپ چىقتى.تىلغا ئېلىشقا ئەرزىيدىغىنى ، بۇ ئاقسىللارنىڭ كۆپىنچىسى ئويۇن ئويناشقا قاتناشقان.SPACA6 قۇرۇلمىسى ۋە ئۇنىڭ IST نىڭ باشقا ئەزالىرى بىلەن بولغان مۇناسىۋىتى سۈت ئەمگۈچىلەرنىڭ ئويۇن ئويناشنى بىلىشىمىزدىكى كەمتۈكلۈك بىلەن تەمىنلەيدۇ.
ھەر بىر كىشىلىك ھايات دادىسىنىڭ ئىسپېرمىسى ۋە ئانىنىڭ تۇخۇمىدىن ئىبارەت ئىككى ئايرىم خۇشاللىق ئويۇنىدىن باشلىنىدۇ.بۇ ئىسپېرما كۈچلۈك تاللاش جەريانىنىڭ غەلبىسى ، بۇ جەرياندا مىليونلىغان ئىسپېرما ھۈجەيرىسى ئاياللار جىنسىي يولىدىن ئۆتۈپ ، ھەر خىل توسالغۇلارنى يېڭىپ ، سىغىمچانلىقىنى باشتىن كەچۈرىدۇ ، بۇ ئۇلارنىڭ ھەرىكەتچانلىقى ۋە يەر يۈزى زاپچاسلىرىنىڭ جەريانىنى ئاشۇرىدۇ.ئىسپېرما بىلەن تۇخۇم ھۈجەيرىسى بىر-بىرىنى تاپسىمۇ ، بۇ جەريان تېخى ئاخىرلاشمىدى.تۇخۇم ھۈجەيرىسى بىر قەۋەت ھۈجەيرە ھۈجەيرىسى ۋە zona pellucida دەپ ئاتىلىدىغان گلىكوپروتىن توسىقى بىلەن قورشالغان ، بۇ ئارقىلىق ئىسپېرما چوقۇم تۇخۇم ھۈجەيرىسىگە كىرىشى كېرەك.ئىسپېرمازوئا يەر يۈزىدىكى يېپىشقاق مولېكۇلا ۋە پەردىگە مۇناسىۋەتلىك ۋە ئاجرىتىلغان فېرمېنتلارنىڭ بىرىكمىسىنى ئىشلىتىپ ، بۇ ئاخىرقى توساقلارنى يېڭىدۇ.بۇ مولېكۇلا ۋە فېرمېنتلار ئاساسلىقى ئىچكى پەردە ۋە كىسلاتالىق ماترىسسادا ساقلىنىدۇ ھەمدە ئاكروسوم رېئاكسىيەسى جەريانىدا ئىسپېرمىنىڭ سىرتقى پەردىسى لايلانغان ۋاقىتتا بايقىلىدۇ.بۇ كەسكىن سەپەرنىڭ ئاخىرقى قەدىمى ئىسپېرما-تۇخۇمنىڭ بىرىكىش ھادىسىسى بولۇپ ، بۇ ئىككى ھۈجەيرە پەردىسىنى بىرىكتۈرۈپ يەككە چۆكمە ئورگانىزىمغا ئايلىنىدۇ 7.گەرچە بۇ جەريان ئىنسانلارنىڭ كۆپىيىشىدە بۆسۈش ھاسىل قىلسىمۇ ، ئەمما زۆرۈر مولېكۇلا ئۆز-ئارا تەسىرنى ياخشى چۈشىنىشكە بولمايدۇ.
ئويۇنلارنىڭ ئوغۇتلىنىشىدىن باشقا ، ئىككى خىل ياغ سۇيۇقلۇقىنىڭ بىرىكىشىنىڭ خىمىيىسى كەڭ كۆلەمدە تەتقىق قىلىندى.ئادەتتە ، پەردىنىڭ بىرىكىشى ئېنېرگىيىگە پايدىسىز جەريان بولۇپ ، ئاقسىل كاتالىزاتورنىڭ قۇرۇلمىنى ئۆزگەرتىش ئۆزگىرىشىنى تەلەپ قىلىپ ، ئىككى پەردىنى يېقىنلاشتۇرىدۇ ، ئۇلارنىڭ ئىزچىللىقىنى بۇزىدۇ ۋە بىرىكىشنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.بۇ ئاقسىل كاتالىزاتور فوسېنگېن دەپ ئاتىلىدىغان بولۇپ ، سانسىزلىغان بىرىكتۈرۈش سىستېمىسىدا بايقالغان.ئۇلار ساھىبجامال ھۈجەيرىگە ۋىرۇسنىڭ كىرىشى ئۈچۈن تەلەپ قىلىنىدۇ (مەسىلەن ، HIV-1 دىكى gp160 ، تاجىسىمان ۋىرۇستا تاياقچە باكتېرىيەسى ، تارقىلىشچان زۇكام ۋىرۇسىدىكى گېماگلۇتىن) ئۆسۈملۈكلەر ، نامايىشچىلار ۋە بوغۇم ئاغرىقلىرىدىكى HAP2 / GCS1) 16،17،18،19.گەرچە بىر نەچچە ئاقسىلنىڭ ئويۇن ئويناش ۋە بىرىكىشىدە ئىنتايىن مۇھىم ئىكەنلىكى ئىسپاتلانغان بولسىمۇ ، ئىنسانلارنىڭ ئويۇنلىرىغا ئىشلىتىلىدىغان فۇسوگېن تېخى بايقالمىدى.تۇخۇم بىلەن ئىپادىلەنگەن CD9 چاشقان ۋە ئىنسانلارنىڭ ئويۇنلىرىنىڭ بىرىكىشى ئۈچۈن تەلەپ قىلىنغان تارقىلىشچان ئاقسىل بولۇپ ، تۇنجى بولۇپ 21،22،23 بايقالغان.گەرچە ئۇنىڭ ئېنىق ئىقتىدارى ئېنىق بولمىسىمۇ ، يېپىشتۇرۇش رولى ، تۇخۇم مىكرو ۋىرۇسىدىكى يېپىشقاق فوكۇسنىڭ تۈزۈلۈشى ۋە ياكى تۇخۇم ھۆجەيرىسى ئاقسىلىنىڭ توغرا يەرلىكلىشىشى 24،25،26 بولۇشى مۇمكىن.ئويۇننىڭ بىرىكىشىدە ئىنتايىن مۇھىم بولغان ئىككى تىپىك ئاقسىل ئىسپېرما ئاقسىلى IZUMO127 ۋە تۇخۇم ئاقسىلى JUNO28 بولۇپ ، ئۇلارنىڭ ئۆز-ئارا باغلىنىشى ئويۇننى تونۇش ۋە بىرىكىشتىن ئىلگىرى يېپىشتۇرۇشتىكى مۇھىم قەدەم.ئەر ئىزۇمو 1 چەكمە چاشقىنى ۋە ئايال جۇنو چەكمە چاشقىنى پۈتۈنلەي تۇغماس ، بۇ مودېللاردا ئىسپېرما ئەتراپىدىكى بوشلۇققا كىرىدۇ ، ئەمما ئويۇنلار بىرىكتۈرمەيدۇ.ئوخشاشلا ، ئىنسانلار ۋىرۇسلۇق ئوغۇتلاش تەجرىبىسىدىكى ئويۇنلاردا IZUMO1 ياكى JUNO27,29 ئانتىتېلاغا قارشى داۋالاش ئېلىپ بېرىلغاندا ، بىرىكىش ئازايدى.
يېقىندا ، يېڭىدىن بايقالغان بىر گۇرۇپپا ئىسپېرما ئىپادىلەنگەن ئاقسىل فېنوتىك جەھەتتىن IZUMO1 ۋە JUNO20,30,31,32,33,34,35 غا ئوخشاش بايقالغان.ئىسپېرما ئاقسىلى پەردىسىگە مۇناسىۋەتلىك ئاقسىل 6 (SPACA6) چوڭ تىپتىكى مۇسكۇل ئۆزگىرىشچان تەتقىقاتىدا ئوغۇتلاشتا كەم بولسا بولمايدىغانلىقى ئېنىقلاندى.گېننىڭ Spaca6 گېنىغا كىرگۈزۈلۈشى مۇمكىن بولمىغان ئىسپېرما ئۆسمىسىنى ھاسىل قىلىدۇ ، گەرچە بۇ ئىسپېرما ئۆسمىسى ئەتراپىدىكى بوشلۇققا سىڭىپ كىرىدۇ.چاشقاندىكى كېيىنكى نوكاۋ تەتقىقاتى Spaca6 نىڭ ئويۇننىڭ بىرىكىشى ئۈچۈن 30،32 تەلەپ قىلىدىغانلىقىنى ئىسپاتلىدى.SPACA6 سىناقتا ئاساسەن دېگۈدەك ئىپادىلەنگەن بولۇپ ، IZUMO1 غا ئوخشاش يەرلىكلەشتۈرۈش ئەندىزىسىگە ئىگە ، يەنى ئاكروسوم رېئاكسىيەسىدىن ئىلگىرى ئىسپېرما توپىنىڭ يېقىن ئارىلىقىدا ، ئاندىن 30،32 لىك رېئاكسىيەدىن كېيىن ئېكۋاتور رايونىغا كۆچۈپ كېلىدۇ.Spaca6 گومولوگىيىسى ھەر خىل سۈت ئەمگۈچىلەر ۋە باشقا ئېۋكارىئوتلاردا بار بولۇپ ، ئۇنىڭ ئىنسانلارنىڭ ئويۇن ئويناشنىڭ مۇھىملىقى SPACA6 30 غا قارشى تۇرۇش ئارقىلىق ئىنسانلارنىڭ ۋىرۇستا ئوغۇتلىنىشىنى چەكلەش ئارقىلىق ئىسپاتلانغان.IZUMO1 ۋە JUNO غا ئوخشىمايدىغىنى ، SPACA6 نىڭ قۇرۇلمىسى ، ئۆز-ئارا تەسىرلىرى ۋە ئىقتىدارىنىڭ تەپسىلاتلىرى ئېنىق ئەمەس.
ئىنسانلارنىڭ ئىسپېرمىسى ۋە تۇخۇمنىڭ بىرىكىشىدىكى نېگىزلىك جەرياننى تېخىمۇ ياخشى چۈشىنىش ئۈچۈن ، بىز پىلانلىق تۇغۇت ۋە تۇغۇتنى داۋالاشتىكى كەلگۈسى تەرەققىياتلارنى بىلەلەيمىز ، بىز SPACA6 قۇرۇلما ۋە بىئو-خىمىيىلىك تەتقىقاتلارنى ئېلىپ باردۇق.SPACA6 نىڭ تاشقى ھۈجەيرە دائىرىسىنىڭ خرۇستال قۇرۇلمىسىدا تۆت خىلىتلىق باغلام (4HB) ۋە ئىممۇنىتېت سىستېمىسىغا ماس كېلىدىغان (Ig غا ئوخشاش) دائىرە جانلىق رايونلار ئۇلانغان.ئىلگىرىكى تەتقىقاتلاردا مۆلچەرلەنگىنىدەك ، SPACA6 نىڭ تور قۇرۇلمىسى 7 مىليون 327 مىڭ 37 ئادەم IZUMO1 بىلەن ئوخشاش بولۇپ ، بۇ ئىككى خىل ئاقسىل ئادەتتىن تاشقىرى موتىفقا ئىگە: 4HB ئۈچبۇلۇڭ شەكىللىك يانتۇ يۈزى ۋە بىر جۈپ دېسففىد بىلەن باغلانغان CXXC نەقىش.بىز IZUMO1 ۋە SPACA6 نىڭ ھازىر ئويۇننىڭ بىرىكىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئاقسىللارنىڭ تېخىمۇ چوڭ ، قۇرۇلما خاراكتېرلىك دەرىجىدىن تاشقىرى ئائىلىگە ئېنىقلىما بېرىشىنى تەۋسىيە قىلىمىز.ئادەتتىن تاشقىرى ئائىلىگە خاس ئىقتىدارلارنى ئىشلىتىپ ، بىز AlphaFold قۇرۇلمىلىق ئىنسان ئاقسىلى ھەققىدە ئىزدىنىپ ، بۇ ئادەتتىن تاشقىرى ئائىلىنىڭ قوشۇمچە ئەزالىرىنى ئېنىقلىدۇق ، بۇنىڭ ئىچىدە ئويۇن ئويناش ۋە ياكى ئوغۇتلاشقا قاتناشقان بىر قانچە ئەزامۇ بار.ھازىر ئويۇننىڭ بىرىكىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئاقسىللارنىڭ ئورتاق قۇرۇلما قاتلىمى ۋە ئادەتتىن تاشقىرى ئائىلىدە ئىكەنلىكى كۆرۈلىدۇ ، بىزنىڭ قۇرۇلمىمىز ئىنسانلارنىڭ ئويۇن ئويناش مېخانىزىمىنىڭ بۇ مۇھىم تەرىپىنىڭ مولېكۇلا خەرىتىسىنى تەمىنلەيدۇ.
SPACA6 بىر خىل ئۆتكۈنچى تارقىلىشچان ئاقسىل بولۇپ ، بىر N ئۇلانغان گلىكان ۋە ئالتە خىل ئوكسىدلانغان دېسففىدلىق زايوم بار (S1a ۋە S2 رەسىملەر).بىز Drosophila S2 ھۈجەيرىسىدىكى ئىنسانلارنىڭ SPACA6 (قالدۇقلىرى 27-26) نىڭ تاشقى ھۈجەيرە دائىرىسىنى ئىپادىلىدۇق ۋە نىكېلنىڭ يېقىنلىقى ، كاتەكچە ئالماشتۇرۇش ۋە چوڭ-كىچىكلىكىنى چەكلەش خروموگرافىيىسى ئارقىلىق ئاقسىلنى ساپلاشتۇردۇق (S1b رەسىم).ساپلاشتۇرۇلغان SPACA6 ectodomain ناھايىتى مۇقىم ۋە ئوخشاش.چوڭلۇقتىكى چەكلەش خروموگرافىيىسى ئارقىلىق كۆپ قۇتۇپلۇق نۇر چېچىش (SEC-MALS) بىرلەشتۈرۈلگەن ئانالىزدا ھېسابلانغان مولېكۇلا ئېغىرلىقى 26.2 ± 0.5 kDa بولغان بىر چوققا ئاشكارىلاندى (S1c رەسىم).بۇ SPACA6 مونومېرلىق ئېكتودومېننىڭ چوڭ-كىچىكلىكى بىلەن بىردەك بولۇپ ، تازىلاش جەريانىدا ئولىگومېرلىشىشنىڭ يۈز بەرمىگەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.بۇنىڭدىن باشقا ، ئايلانما دىكروزىم (CD) سپېكتروسكوپى ئارىلاشما α / β قۇرۇلمىنى ئېرىتىپ ، ئېرىتىش نۇقتىسى 51.3 ° C (رەسىم S1d ، e).CD سپېكترىنىڭ ئايلىنىشى% 38.6 α- ھېلىلىق ۋە% 15.8 لىك بەلۋاغ ئېلېمېنتلىرىنى ئاشكارىلىدى (S1d رەسىم).
SPACA6 ectodomain تاسادىپىي ماترىسسا ئۇرۇقى 38 ئارقىلىق كىرىستاللاشتۇرۇلدى ، نەتىجىدە ئېنىقلىق دەرىجىسى 2.2 Å (1-جەدۋەل ۋە S3 رەسىم).بۆلەكنى ئاساس قىلغان مولېكۇلا ئالماشتۇرۇش ۋە SAD باسقۇچلۇق سانلىق مەلۇماتنىڭ قۇرۇلمىنى بەلگىلەش ئۈچۈن برومد بىلەن ئۇچرىشىشى (1-جەدۋەل ۋە S4 رەسىم) بىرلەشتۈرۈلۈپ ، ئاخىرقى ئىنچىكە مودېل 27-2246 قالدۇقلاردىن تەركىب تاپقان.قۇرۇلما بېكىتىلگەن ۋاقىتتا ، ھېچقانداق تەجرىبە ياكى AlphaFold قۇرۇلمىسى يوق ئىدى.SPACA6 ectodomain نىڭ ئۆلچىمى 20 Å × 20 Å × 85 Å بولۇپ ، يەتتە خىلىت ۋە توققۇز β بەلۋاغتىن تەركىب تاپقان ، ھەمدە ئۇزۇنغا سوزۇلغان ئۈچىنچى قاتلىما ئالتە دىففىلسىز زايوم ئارقىلىق مۇقىملاشتۇرۇلغان (رەسىم 1a ، b).Asn243 يان زەنجىرىنىڭ ئاخىرىدىكى ئاجىز ئېلېكتر زىچلىقى بۇ قالدۇقنىڭ N ئۇلانغان گلىكوزىللاش ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.بۇ قۇرۇلما ئىككى ساھەدىن تەركىب تاپقان: N تېرمىنال تۆت خېلىكلىق باغلام (4HB) ۋە C تېرمىنالى Ig غا ئوخشاش دائىرە ، ئۇلار ئوتتۇرىسىدا ئوتتۇرا ھالقا رايونى بار (1-رەسىم).
SPACA6 نىڭ تاشقى ھۈجەيرە دائىرىسىنىڭ قۇرۇلمىسى.SPACA6 نىڭ تاشقى ھۈجەيرە دائىرىسىنىڭ سىزىقلىق دىئاگراممىسى ، N دىن C تېرمىنالىغىچە بولغان زەنجىرنىڭ رەڭگى قېنىق كۆكتىن قېنىق قىزىل رەڭگىچە.دېفففىدلىق زايومغا قاتناشقان سىستايىنلار ماگېنتادا گەۋدىلىنىدۇ.b SPACA6 نىڭ تاشقى ھۈجەيرە دائىرىسىنىڭ توپولوگىيەسى.1a رەسىمدىكىگە ئوخشاش رەڭ لايىھىسىنى ئىشلىتىڭ.c SPACA6 تاشقى ھۈجەيرە دائىرىسى.4HB ، hinge ۋە Ig غا ئوخشاش دائىرە سىزىقلىرى ئايرىم-ئايرىم ھالدا ئاپېلسىن ، يېشىل ۋە كۆك رەڭدە بولىدۇ.قەۋەتلەر كۆلەمگە تارتىلمايدۇ.
SPACA6 نىڭ 4HB دائىرىسى تۆت ئاساسلىق خىلىتنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ (خىلىتلار 1-4) ، بۇلار تىك ئۇچار شەكىلدە ئورۇنلاشتۇرۇلغان (2a رەسىم) ، پاراللېل ۋە پاراللېل ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدۇ (2b رەسىم).كىچىك قوشۇمچە يەككە ئايلانما خېلېس (helix 1 ′) باغلامغا ئۇدۇل ياتقۇزۇلۇپ ، 1- ۋە 2-نومۇرلۇق خىلىتلار بىلەن ئۈچبۇلۇڭ شەكىللىنىدۇ. رەسىم 2a).
4HB N تېرمىنال بەلۋاغ جەدۋىلى.b بىر يۈرۈش تۆت ھالقىلارنىڭ ئۈستۈنكى كۆرۈنۈشى ، ھەر بىر خېلىكس N تېرمىنالىدا قېنىق كۆك ، C تېرمىنالىدا قېنىق قىزىل رەڭدە گەۋدىلەنگەن.c 4HB نىڭ يۇقىرى-تۆۋەن ئايلانما چاقى دىئاگراممىسى ، ھەر بىر قالدۇققا يەككە ھەرىپلىك ئامىنو كىسلاتا كودى يېزىلغان چەمبەر شەكلىدە كۆرسىتىلدى.چاقنىڭ ئۈستىدىكى تۆت خىل ئامىنو كىسلاتاسىلا سانالغان.قۇتۇپسىز قالدۇقلار سېرىق رەڭلىك ، قۇتۇپ زەرەتلىمىگەن قالدۇقلار يېشىل رەڭدە ، مۇسبەت زەرەتلەنگەن قالدۇقلار كۆك ، مەنپىي زەرەتلەنگەن قالدۇقلار قىزىل رەڭدە بولىدۇ.d 4HB دائىرىسىنىڭ ئۈچبۇلۇڭلۇق چىرايى ، ئاپېلسىن رەڭدە 4HB ، يېشىل رەڭدە.ھەر ئىككى قىستۇرما تاياق شەكىللىك دېسففىدلىق باغلىنىشنى كۆرسىتىدۇ.
4HB ئاساسلىقى ئالفاتىك ۋە خۇشپۇراق قالدۇقلاردىن تەركىب تاپقان ئىچكى گىدروپوبىك يادروغا مەركەزلەشكەن (2c رەسىم).يادروسى Cys41 بىلەن Cys55 ئارىسىدىكى دىففىلسىز باغلىنىشنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ ، ئۇ يۇقىرى كۆتۈرۈلگەن ئۈچبۇلۇڭدا 1 ۋە 2 خىلىتلارنى تۇتاشتۇرىدۇ (2-رەسىم).Helix 1 in دىكى CXXC نەقىشى بىلەن ئېڭەك رايونىدىكى hair چاچ پاچىقىنىڭ ئۇچىدىن تېپىلغان يەنە بىر CXXC نەقىش ئوتتۇرىسىدا ئىككى قوشۇمچە دېسففىدلىق باغلىنىش شەكىللەنگەن (2d رەسىم).نامەلۇم فۇنكىسىيەسى بار (Arg37) مۇتەئەسسىپ ئارگىننىڭ قالدۇقى 1 ′ ، 1 ۋە 2-نومۇرلۇق خىلىتلار شەكىللەنگەن كاۋاك ئۈچبۇلۇڭنىڭ ئىچىگە جايلاشقان بولۇپ ، Cβ ، Cγ ۋە Cδ Arg37 گىدروفوبىك يادرو بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدۇ ، ئۇنىڭ گانىدىن گۇرۇپپىلىرى دەۋرىيلىك ھەرىكەت قىلىدۇ. Thr32 ئومۇرتقىسى بىلەن يان زەنجىرنىڭ ئۆز-ئارا تەسىر قىلىشى ئارقىلىق 1 ′ ۋە 1 ئارىلىقىدا (S5a ، b).Tyr34 بوشلۇققا كېڭىيىپ ، Arg37 ئېرىتكۈچى بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتەلەيدىغان ئىككى كىچىك بوشلۇقنى قالدۇردى.
Ig غا ئوخشاش β- ساندۋىچ دائىرە چوڭ تىپتىكى دەرىجىدىن تاشقىرى چوڭ ئاقسىل بولۇپ ، ئىككى ياكى ئۇنىڭدىن ئارتۇق كۆپ لىنىيىلىك ئاممىياك β ۋاراقنىڭ گىدروپوبىكلىق يادرو ئارقىلىق ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدىغان ئورتاق ئالاھىدىلىكىنى ئورتاقلاشتۇرىدۇ. ھەمدە ئىككى قەۋەتتىن تەركىب تاپقان (رەسىم S6a).1-جەدۋەل بولسا تۆت تال (D ، F ، H ۋە I) سىزىقلىق β جەدۋەل بولۇپ ، بۇ يەردە F ، H ۋە مەن پاراللېلغا قارشى ئورۇنلاشتۇرۇش ھاسىل قىلىمەن ، I ۋە D سىزىقلىرى پاراللېل ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدۇ.2-جەدۋەل كىچىك پاراللېلغا قارشى قوش سىزىقلىق beta جەدۋىلى (E ۋە G).E زەنجىرىنىڭ C تېرمىنالى بىلەن H زەنجىرىنىڭ مەركىزى (Cys170-Cys226) ئوتتۇرىسىدا ئىچكى دېسففىدلىق باغلىنىش كۆرۈلگەن (S6b رەسىم).بۇ گۈڭگۈرتسىز زايوم ئىممۇنىتلوگلىننىڭ 40،41 ساندۋىچ ساھەسىدىكى دېسففىدلىق باغلىنىشقا ئوخشايدۇ.
تۆت تال β ۋاراق پۈتۈن ئۇزۇنلۇقىدا ئەگرى-توقاي بولۇپ ، شەكلى ۋە ئېلېكترو سىتاتىكتا ئوخشىمايدىغان سىممېترىك بولمىغان قىرلارنى ھاسىل قىلىدۇ.نېپىز قىر بولسا تەكشى گىدروپوبىك مۇھىت يۈزى بولۇپ ، SPACA6 دىكى قالغان تەكشى بولمىغان ۋە ئېلېكتر سىستىمىلىق كۆپ خىل يۈزلەرگە سېلىشتۇرغاندا ئالاھىدە كۆزگە كۆرۈنەرلىك (S6b ، c).ئاشكارلانغان ئومۇرتقا كاربونېل / ئامىنو گۇرۇپپىسى ۋە قۇتۇپ يان زەنجىرسىمان خالو گىدروفوبىك يۈزىنى ئوراپ تۇرىدۇ (S6c رەسىم).تېخىمۇ كەڭ گىرۋەك گىدروپوبىك يادروسىنىڭ N تېرمىنال قىسمىنى توسىدىغان ۋە F زەنجىرسىمان ئومۇرتقا تۈۋرۈكىنىڭ ئوچۇق قۇتۇپ گۇرۇپپىسى بىلەن ئۈچ ھىدروگېن رىشتىسى ھاسىل قىلىدىغان قاپلانغان خىلىتلىق بۆلەك بىلەن قاپلانغان (S6d رەسىم).بۇ قىرنىڭ C تېرمىنال قىسمى قىسمەن ئاشكارلانغان گىدروپوبىك يادروسى بىلەن چوڭ يانچۇقنى شەكىللەندۈرىدۇ.ئۈچ يۈرۈش قوش ئارگىن قالدۇقى (Arg162-Arg221 ، Arg201-Arg205 ۋە Arg212-Arg214) ۋە مەركىزىي گىستودىن (His220) سەۋەبىدىن يانچۇق ئاكتىپ توك بىلەن قورشالغان.
ئېڭەك رايونى تىك يۆنىلىشلىك دائىرە بىلەن Ig گە ئوخشاش دائىرە ئارىسىدىكى قىسقا بۆلەك بولۇپ ، ئۇ ئۆز ئارا پاراللېل ئۈچ سىزىقلىق β قەۋەت (A ، B ۋە C بەلۋاغ) ، كىچىك 310 خېلىكس ۋە بىر نەچچە ئۇزۇن ئىختىيارى تىك بۆلەكتىن تەركىب تاپقان.(S7.).يانتۇ رايوندىكى يانتۇ ۋە ئېلېكتروستاتتىك ئالاقە تورى 4HB بىلەن Ig غا ئوخشاش دائىرە ئوتتۇرىسىدىكى يۆنىلىشنى مۇقىملاشتۇرىدىغاندەك قىلىدۇ.تورنى ئۈچ قىسىمغا بۆلۈشكە بولىدۇ.بىرىنچى قىسمى ئىككى خىل CXXC موتىفنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ (27CXXC30 ۋە 139CXXC142) ، ئۇ چاچتىكى چاچ پاسونى بىلەن 4HB دىكى 1 ′ helix ئوتتۇرىسىدا بىر جۈپ دېسففىدلىق باغلىنىش ھاسىل قىلىدۇ.ئىككىنچى قىسمى Ig غا ئوخشاش دائىرە بىلەن ئېڭەك ئوتتۇرىسىدىكى ئېلېكتروستاتتىك ئۆز-ئارا تەسىرنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.ئېڭەكتىكى Glu132 تۇزغا ئوخشاش كۆۋرۈك ھاسىل قىلىدۇ ، Ig غا ئوخشاش دائىرە ئىچىدە Arg233 ، ئېقىندا Arg135 بار.ئۈچىنچى قىسمى Ig غا ئوخشاش دائىرە بىلەن ئېڭەك رايونى ئوتتۇرىسىدىكى يانتۇ باغلىنىشنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.ئىككى خىل دېسففىدلىق زايوم (Cys124-Cys147 ۋە Cys128-Cys153) ھالقىسىمان ھالقىنى Gln131 بىلەن ئومۇرتقا فۇنكسىيە گۇرۇپپىسىنىڭ ئېلېكتر سىتاتىك ئۆز-ئارا تەسىر قىلىشى ئارقىلىق مۇقىملاشتۇرغۇچقا ئۇلايدۇ ، بۇ تۇنجى Ig غا ئوخشاش تور نامىغا ئېرىشەلەيدۇ.زەنجىر.
SPACA6 ectodomain نىڭ قۇرۇلمىسى ۋە 4HB ۋە Ig غا ئوخشاش دائىرە ئىچىدىكى يەككە قۇرۇلمىلار ئاقسىل سانلىق مەلۇمات ئامبىرىدىكى قۇرۇلما جەھەتتىن ئوخشاش خاتىرىلەرنى ئىزدەشكە ئىشلىتىلگەن.بىز يۇقىرى Dali Z نومۇرى ، كىچىك ئۆلچەملىك ياتلىشىش ۋە چوڭ LALI نومۇرى بىلەن مۇسابىقىنى ئېنىقلىدۇق (كېيىنكىسى قۇرۇلما تەڭ قالدۇقلارنىڭ سانى).پۈتۈن ئېكتودومېن ئىزدەش (S1 جەدۋەل) دىكى ئالدىنقى 10 قېتىملىق زەربەنىڭ قوبۇل قىلغىلى بولىدىغان Z نومۇرى> 842 بولغان بولسا ، 4HB ياكى Ig غا ئوخشاش تور نامىنى ئىزدەش ئارقىلىقلا بۇ زەربەلارنىڭ كۆپىنچىسى پەقەت ساندۋىچقا ماس كېلىدىغانلىقى كۆرسىتىلدى.نۇرغۇن ئاقسىللاردا بايقالغان ھەممە يەرنى قاپلىغان.دالىدىكى ئۈچ ئىزدەشنىڭ ھەممىسى پەقەت بىرلا نەتىجىنى قايتۇردى: IZUMO1.
ئۇزۇندىن بۇيان SPACA6 بىلەن IZUMO1 نىڭ قۇرۇلما ئوخشاشلىقى 7،32،37 ئىكەنلىكى ئوتتۇرىغا قويۇلغان.گەرچە بۇ ئىككى خىل ئويۇننىڭ بىرىكىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئاقسىلنىڭ ئېكولوگىيىلىك ماددىلىرى ئاران% 21 تەرتىپلىك سالاھىيەتكە ئىگە (S8a رەسىم) ، ئەمما ساقلانغان پاكىتلار ، ساقلانغان دىسفىلسىز زايوم ئەندىزىسى ۋە SPACA6 دىكى ئالدىن پەرەز قىلىنغان C تېرمىنال Ig غا ئوخشاش تورنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. A SPACA6 چاشقىنەكنىڭ گومولوگىيە مودېلى IZUMO1 نى قېلىپ قىلىپ 37.بىزنىڭ قۇرۇلمىمىز بۇ پەرەزلەرنى ئىسپاتلايدۇ ۋە ھەقىقىي ئوخشاشلىق دەرىجىسىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.ئەمەلىيەتتە ، SPACA6 ۋە IZUMO137,43,44 قۇرۇلمىلار ئوخشاش ئىككى ساھە قۇرۇلمىسىنى ئورتاقلاشتۇرىدۇ (رەسىم S8b) ، ئوخشاش 4HB ۋە Ig غا ئوخشاش β ساندۋىچ دائىرە بىلەن باغلىنىشلىق رايون تۇتاشتۇرۇلغان (S8c رەسىم).
IZUMO1 ۋە SPACA6 4HB ئادەتتىكى ئايلانما باغلام بىلەن كۆپ پەرقلىنىدۇ.تىپىك 4HBs ، SNARE ئاقسىل بىرىكمىسىدە بايقالغانلارغا ئوخشاش ، 45،46 ، ئىچكى ئوق ئارىلىقىدا تۇراقلىق ئەگرى سىزىقنى ساقلايدۇ. 47. بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا ، IZUMO1 ۋە SPACA6 نىڭ ھەر ئىككىلىسىدىكى تەۋرىنىش دائىرىسى بۇرمىلانغان ، ئۆزگىرىشچان ئەگرى سىزىق ۋە ئۆزگىرىشچان. تەكشى ئورالماسلىق (S8d رەسىم).بۇ بۇرۇلۇش بەلكىم 1 ′ ، 1 ۋە 2 خىلىتلار تەرىپىدىن شەكىللەنگەن ئۈچبۇلۇڭدىن كېلىپ چىققان بولۇشى مۇمكىن ، IZUMO1 ۋە SPACA6 دە ساقلىنىپ ، helix 1 on دىكى ئوخشاش CXXC نەقىش ئارقىلىق مۇقىملاشتۇرۇلغان.قانداقلا بولمىسۇن ، SPACA6 (Cys41 ۋە Cys55 ئۆز-ئارا تۇتاشتۇرۇلغان 1-ۋە 2-نومۇرلۇق خىلىتلارنى ئۆز-ئارا تۇتاشتۇرىدۇ) دىن تېپىلغان قوشۇمچە دېسففىدلىق باغلىنىش ئۈچبۇلۇڭ چوققىسىدا تېخىمۇ ئۆتكۈر چوققا ھاسىل قىلىپ ، SPACA6 IZUMO1 غا قارىغاندا تېخىمۇ ئەگرى-توقاي بولۇپ ، تېخىمۇ كۆرۈنەرلىك بوشلۇق ئۈچبۇلۇڭى بار.بۇنىڭدىن باشقا ، IZUMO1 دا SPACA6 دىكى بۇ كاۋاكنىڭ مەركىزىدە كۆزىتىلگەن Arg37 كەمچىل.بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا ، IZUMO1 ئالفاتىك ۋە خۇشپۇراق قالدۇقلارنىڭ تېخىمۇ تىپىك گىدروپوبىك يادروسىغا ئىگە.
IZUMO1 نىڭ قوش يۆنىلىشلىك ۋە بەش تال β جەدۋەلدىن تەركىب تاپقان Ig غا ئوخشاش تور دائىرىسى بار.IZUMO1 دىكى ئارتۇقچە بەلۋاغ SPACA6 دىكى كاتەكنىڭ ئورنىنى ئالىدۇ ، ئۇ F تال بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىپ ، غولدىكى ئومۇرتقا ھىدروگېن رىشتىنى چەكلەيدۇ.سېلىشتۇرۇشنىڭ قىزىقارلىق يېرى شۇكى ، ئىككى خىل ئاقسىلنىڭ Ig گە ئوخشاش دائىرەلىرىنىڭ ئالدىن پەرەز قىلىنغان يەر يۈزى زەرەتلىنىشى.IZUMO1 يۈزى SPACA6 يۈزىگە قارىغاندا سەلبىي زەرەتلىنىدۇ.قوشۇمچە توك قاچىلاش C تېرمىنالىغا يېقىن بولۇپ ، ئىسپېرما پەردىسىگە قارايدۇ.SPACA6 دە ، ئوخشاش رايونلار تېخىمۇ بىتەرەپ ياكى ئاكتىپ زەرەتلەنگەن (رەسىم S8e).مەسىلەن ، SPACA6 دىكى گىدروپوبىك يۈزى (ئىنچىكە قىرلار) ۋە مۇسبەت زەرەتلەنگەن ئورەكلەر (كەڭرى قىرلار) IZUMO1 دە مەنپىي زەرەتلىنىدۇ.
گەرچە IZUMO1 بىلەن SPACA6 ئوتتۇرىسىدىكى مۇناسىۋەت ۋە ئىككىلەمچى قۇرۇلما ئېلېمېنتلىرى ياخشى ساقلانغان بولسىمۇ ، ئەمما Ig غا ئوخشاش تور دائىرىلىرىنىڭ قۇرۇلما ماسلىشىشى بۇ ئىككى ساھەنىڭ بىر-بىرىگە سېلىشتۇرغاندا ئومۇمىي يۆنىلىشىنىڭ ئوخشىمايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بەردى (S9 رەسىم).IZUMO1 نىڭ ئايلانما باغلىنىشى β- ساندۋىچ ئەتراپىدا ئەگرى بولۇپ ، ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەن «بۇمېراڭ» شەكلىنى مەركىزى ئوقتىن تەخمىنەن 50 ° ئەتراپىدا ھاسىل قىلغان.بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا ، SPACA6 دىكى تىك ئۇچار نۇر قارشى يۆنىلىشتە تەخمىنەن 10 ° يانتۇ.بۇ يۆنىلىشتىكى ئوخشىماسلىق بەلكىم ئېڭەك رايونىدىكى ئوخشىماسلىق سەۋەبىدىن بولۇشى مۇمكىن.دەسلەپكى تەرتىپ سەۋىيىسىدە ، IZUMO1 ۋە SPACA6 نىڭ سىستىېن ، گلىكسىن ۋە ئاسپىرىن كىسلاتا قالدۇقى بۇنىڭ سىرتىدا.نەتىجىدە ھىدروگېن زايومى ۋە ئېلېكتر سىتاتىك تورى پۈتۈنلەي ئوخشىمايدۇ.et ۋاراق ئىككىلەمچى قۇرۇلما ئېلېمېنتلىرىنى IZUMO1 ۋە SPACA6 ھەمبەھىرلەيدۇ ، گەرچە IZUMO1 دىكى زەنجىرلەر بىر قەدەر ئۇزۇن ، 310 helix (helix 5) SPACA6 غا خاس.بۇ ئوخشىماسلىق ئوخشىمىغان ئىككى خىل ئاقسىلنىڭ ئوخشىمىغان تور يۆنىلىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.
بىزنىڭ دالى مۇلازىمېتىرىمىزدىن بايقىلىشىچە ، SPACA6 ۋە IZUMO1 ئاقسىل سانلىق مەلۇمات ئامبىرىدا ساقلانغان سىناق تەرىقىسىدە بېكىتىلگەن ئىككى قۇرۇلما بولۇپ ، بۇ ئالاھىدە 4HB قاتلىمى بار (S1 جەدۋەل).يېقىندىن بۇيان ، DeepMind (Alphabet / Google) نېرۋا تورىنى ئاساس قىلغان AlphaFold نى تەتقىق قىلىپ چىقتى ، ئۇ دەسلەپكى تەرتىپتىكى ئاقسىللارنىڭ 3D قۇرۇلمىسىنى توغرا مۆلچەرلىيەلەيدۇ.بىز SPACA6 قۇرۇلمىسىنى ھەل قىلىپ ئۇزۇن ئۆتمەي ، AlphaFold سانلىق مەلۇمات ئامبىرى ئېلان قىلىندى ، ئىنسانلارنىڭ ئاقسىلدىكى بارلىق ئاقسىللارنىڭ% 98.5 نى ئۆز ئىچىگە ئالغان ئالدىن مەلۇمات قۇرۇلمىسى تەمىنلەندى.ھەل قىلىنغان SPACA6 قۇرۇلمىسىنى ئىزدەش ئەندىزىسى سۈپىتىدە ئىشلىتىپ ، AlphaFold ئىنسان ئاقسىلىدىكى مودېلنى قۇرۇلما خاراكتېرلىك گومولوگىيەلىك ئىزدەش SPACA6 ۋە IZUMO1 بىلەن قۇرۇلما ئوخشاشلىقى بار كاندىداتلارنى ئېنىقلاپ چىقتى.AlphaFold نىڭ SPACA6 (S10a رەسىم) نى مۆلچەرلەشتىكى كىشىنىڭ ئىشەنگۈسى كەلمەيدىغان توغرىلىقىنى كۆزدە تۇتقاندا ، بولۇپمۇ بىزنىڭ ھەل قىلىنغان قۇرۇلمىمىزغا سېلىشتۇرغاندا 1.1 Å rms ectodomain (S10b رەسىم) - بىز ئېنىقلانغان SPACA6 مۇسابىقىسىنىڭ توغرا بولۇشى مۇمكىنلىكىگە ئىشەنچ قىلالايمىز.
ئىلگىرى PSI-BLAST ئىسپېرما بىلەن مۇناسىۋەتلىك باشقا ئۈچ خىل ئاقسىل بىلەن IZUMO1 گۇرۇپپىسىنى ئىزدىگەن: IZUMO2 ، IZUMO3 ۋە IZUMO450.AlphaFold نىڭ مۆلچەرىچە ، بۇ IZUMO ئائىلە ئاقسىلى گەرچە Ig غا ئوخشاش دائىرە بولمىسىمۇ ، IZUMO1 (رەسىم 3a ۋە S11) بىلەن ئوخشاش دېسففىدسىز باغلىنىش ئەندىزىسى بىلەن 4HB ساھەسىگە قاتلىنىدۇ.IZUMO2 ۋە IZUMO3 نىڭ IZUMO1 غا ئوخشاش بىر تەرەپلىمىلىك پەردە ئاقسىلى ئىكەنلىكى پەرەز قىلىنغان ، IZUMO4 بولسا ئاجرىلىپ چىققاندەك قىلىدۇ.IZUMO 2 ، 3 ۋە 4 ئاقسىلنىڭ ئويۇنلارنىڭ بىرىكىشىدىكى رولى ئېنىقلانمىدى.IZUMO3 ئىسپېرما ئۆسمىسىنىڭ تەرەققىي قىلىشى جەريانىدا ئاكروسوم بىئوگېنىزىمدا رول ئوينايدىغانلىقى مەلۇم ، IZUMO ئاقسىلى مۇرەككەپ 50 نى شەكىللەندۈرىدۇ.سۈت ئەمگۈچىلەر ، ئۆمىلىگۈچى ھايۋانلار ۋە سۇغارغۇچىلاردا IZUMO ئاقسىلىنىڭ ساقلىنىشى ئۇلارنىڭ يوشۇرۇن ئىقتىدارىنىڭ DCST1 / 2 ، SOF1 ۋە FIMP غا ئوخشاش باشقا ئويۇنلار بىلەن بىرىكىشكە مۇناسىۋەتلىك ئاقسىللارنىڭ ماس كېلىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
IST دەرىجىدىن تاشقىرى ئائىلىنىڭ دائىرە قۇرۇلمىسىنىڭ دىئاگراممىسى ، ئايرىم-ئايرىم ھالدا 4HB ، hinge ۋە Ig غا ئوخشاش تور دائىرىسى ئاپېلسىن ، يېشىل ۋە كۆك رەڭدە گەۋدىلەنگەن.IZUMO4 نىڭ ئۆزىگە خاس بولغان C تېرمىنال رايونى بار.جەزملەشتۈرۈلگەن ۋە قويۇق دېسففىدلىق زايوم ئايرىم-ئايرىم قاتتىق ۋە چېكىتلىك سىزىقلار ئارقىلىق كۆرسىتىلىدۇ.b IZUMO1 (PDB: 5F4E), SPACA6, IZUMO2 (AlphaFold DB: AF-Q6UXV1-F1), IZUMO3 (AlphaFold DB: AF-Q5VZ72-F1), IZUMO4 (AlphaFold DB: AF-Q1ZYL8-F1) DB: AF-Q1ZYL8-F1): AF-Q1ZYL8-F1): AF-Q3KNT9-F1) ئوخشاش رەڭ دائىرىسىدە كۆرسىتىلىدۇ.TMEM95 ، IZUMO2 ۋە IZUMO3 تارقىلىشچان خىلىتلار كۆرسىتىلمىدى.
IZUMO ئاقسىلىغا ئوخشىمايدىغىنى ، باشقا SPACA ئاقسىلى (يەنى SPACA1 ، SPACA3 ، SPACA4 ، SPACA5 ۋە SPACA9) قۇرۇلما جەھەتتىن SPACA6 بىلەن ئوخشىمايدۇ دەپ قارىلىدۇ (S12 رەسىم).پەقەت SPACA9 نىڭ 4HB سى بار ، ئەمما ئۇ پاراللېلغا قارشى پاراللېلغا قارشى يۆنىلىش ياكى SPACA6 بىلەن ئوخشاش دېفففىدلىق باغلىنىشنىڭ بولۇشىدىن ئۈمىد يوق.پەقەت SPACA1 غا ئوخشاش Ig غا ئوخشاش دائىرە بار.AlphaFold نىڭ مۆلچەرىچە ، SPACA3 ، SPACA4 ۋە SPACA5 نىڭ قۇرۇلمىسى SPACA6 غا پۈتۈنلەي ئوخشىمايدۇ.قىزىقارلىق يېرى ، SPACA4 نىڭ ئوغۇتلاش رولىنى ئوينايدىغانلىقىمۇ مەلۇم ، ئەمما SPACA6 غا قارىغاندا تېخىمۇ كۆپ بولۇپ ، ئۇنىڭ ئورنىغا ئىسپېرما بىلەن تۇخۇم ھۈجەيرىسى زەمبۇرۇغىنىڭ ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىشىنى ئاسانلاشتۇرىدۇ.
بىزنىڭ AlphaFold ئىزدىشىمىز IZUMO1 ۋە SPACA6 4HB ، TMEM95 غا ماس كېلىدىغان يەنە بىر ماسلىقنى تاپتى.TMEM95 ، يەككە ئىسپېرما خاراكتېرلىك تارقىلىشچان ئاقسىل ، 32،33 نى ئەمەلدىن قالدۇرغاندا ئەر چاشقانلارنى تۇغماس قىلىدۇ.TMEM95 كەمچىل بولغان ئىسپېرما تومۇرنىڭ نورمال مورفولوگىيىسى ، ھەرىكەتچانلىقى ۋە زونا پېللوسىدىغا سىڭىپ كىرىپ تۇخۇم پەردىسىگە باغلاش ئىقتىدارى بار ، ئەمما تۇخۇم ھۈجەيرىسى بىلەن بىرىكىشكە ئامالسىز.ئىلگىرىكى تەتقىقاتلاردا TMEM95 نىڭ IZUMO133 بىلەن قۇرۇلما ئوخشاشلىقى بارلىقى كۆرسىتىلدى.دەرۋەقە ، AlphaFold مودېلى TMEM95 نىڭ 4HB ئىكەنلىكىنى ، IZUMO1 ۋە SPACA6 غا ئوخشاش CXXC نەقىش ۋە SPACA6 دىن تېپىلغان 1 ۋە 2 خىلىتلار ئارىسىدىكى ئوخشاش قوشۇمچە دېسففىدلىق باغلىنىش ئىكەنلىكىنى دەلىللىدى (3a ۋە S11 رەسىم).گەرچە TMEM95 دا Ig غا ئوخشاش دائىرە بولمىسىمۇ ، ئەمما ئۇنىڭ SPACA6 ۋە IZUMO1 ئېڭەك رايونىغا ئوخشاش دىففىلسىز زايوم ئەندىزىسى بار رايون بار (3b رەسىم).بۇ قوليازما ئېلان قىلىنغان ۋاقىتتا ، دەسلەپكى مۇلازىمېتىر TMEM95 نىڭ قۇرۇلمىسىنى دوكلات قىلىپ ، AlphaFold53 نەتىجىسىنى دەلىللىگەن.TMEM95 SPACA6 ۋە IZUMO1 بىلەن ناھايىتى ئوخشىشىپ كېتىدىغان بولۇپ ، تەدرىجىي ھالدا ئاممىياكلاردا ساقلانغان (4-رەسىم ۋە S13).
PSI-BLAST ئىزدەشتە NCBI SPACA6 ، IZUMO1-4 ، TMEM95 ، DCST1 ، DCST2 ، FIMP ۋە SOF1 سانلىق مەلۇمات ئامبىرىدىن پايدىلىنىپ ، بۇ تەرتىپلەرنىڭ ھاياتلىق دەرىخىدىكى ئورنىنى ئېنىقلىدى.شاخ نۇقتىلىرىنىڭ ئارىلىقى كۆلەم جەھەتتە كۆرسىتىلمەيدۇ.
SPACA6 بىلەن IZUMO1 ئوتتۇرىسىدىكى كۆزگە كۆرۈنەرلىك ئومۇمىي قۇرۇلما ئوخشاشلىقى ئۇلارنىڭ TMEM95 ۋە IZUMO 2 ، 3 ۋە 4 ئاقسىلنى ئۆز ئىچىگە ئالغان ساقلانغان قۇرۇلما دەرىجىدىن تاشقىرى ئائىلىنىڭ ئەزالىرىنى قۇرغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.تونۇلغان ئەزالار: IZUMO1, SPACA6 ۋە TMEM95.پەقەت بىر قانچە ئەزالا Ig غا ئوخشاش تورنامىغا ئىگە بولغاچقا ، IST ئادەتتىن تاشقىرى ئائىلىنىڭ ئالاھىدىلىكى 4HB دائىرىسى بولۇپ ، بۇ ئاقسىللارنىڭ ھەممىسىدە ئورتاق ئالاھىدىلىككە ئىگە: 1) پاراللېلغا قارشى / پاراللېل ئالمىشىشقا ئورۇنلاشتۇرۇلغان خىلىتلار بىلەن 4HB نى بىرلەشتۈرگەن. . قىزىل رەڭلىك سېنزور بولۇش سۈپىتى بىلەن ، 54،55،56 ، IST ئائىلىسىدىكىلەرنىڭ نەقىشى ئويۇننىڭ بىرىكىشىدىكى ERp57 قاتارلىق ئاقسىل دېسففىدلىق ئىزومېرازا بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولىدۇ. رولى 57،58.
IST ئادەتتىن تاشقىرى ئائىلە ئەزالىرى 4HB تور نامىنىڭ ئۈچ خىل ئالاھىدىلىكى بىلەن ئېنىقلىنىدۇ: پاراللېل ۋە پاراللېل يۆنىلىشلىك يۆنىلىشنى ئالماشتۇرىدىغان تۆت خىل ھالقا ، ba ئۈچبۇلۇڭلۇق تىك شەكىللىك يۈز ۋە كىچىك مولېكۇلا ئارىسىدا شەكىللەنگەن ca CXXC قوش موتىف.) N تېرمىنال خېلىكس (ئاپېلسىن) ۋە يانتۇ رايون β- چاچ ساندۇقى (يېشىل).
SPACA6 بىلەن IZUMO1 نىڭ ئوخشاشلىقىنى كۆزدە تۇتۇپ ، ئالدىنقىسىنىڭ IZUMO1 ياكى JUNO بىلەن باغلىنىش ئىقتىدارى سىناق قىلىنغان.Biolayer interferometry (BLI) ھەرىكەتنى ئاساس قىلغان باغلىنىش ئۇسۇلى بولۇپ ، ئىلگىرى IZUMO1 بىلەن JUNO نىڭ ئۆز-ئارا تەسىر قىلىشىنى مىقدارلاشتۇرۇشتا قوللىنىلغان.IZUMO1 بىلەن بىئوتىن بەلگىسى قويۇلغان سېنزور قويۇقلۇقى يۇقىرى بولغان JUNO ئانالىزچىسى يەمچۈك قىلىنغاندىن كېيىن ، كۈچلۈك سىگنال بايقالدى (S14a رەسىم) ، بۇ سېنزور ئۇچىغا چاپلانغان بىئولوگىيىلىك ماددىنىڭ قېلىنلىقىدا باغلىنىشلىق ئۆزگىرىش پەيدا قىلىدىغانلىقىنى كۆرسىتىدۇ.مۇشۇنىڭغا ئوخشاش سىگناللار (يەنى ، JUNO سېنزورغا IZUMO1 ئانالىزىغا يەمچۈك سۈپىتىدە تۇتاشتۇرۇلدى) (S14b رەسىم).SPACA6 سېنزورغا باغلانغان IZUMO1 ياكى سېنزورغا باغلانغان JUNO غا ئانالىز سۈپىتىدە ئىشلىتىلگەندە ھېچقانداق سىگنال بايقالمىدى (S14a رەسىم ، b).بۇ سىگنالنىڭ بولماسلىقى SPACA6 نىڭ تاشقى ھۈجەيرە دائىرىسىنىڭ IZUMO1 ياكى JUNO نىڭ تاشقى ھۈجەيرە دائىرىسى بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسەتمەيدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
BLI تەكشۈرۈشى يەمچۈك ئاقسىلىدىكى ئەركىن لىزېن قالدۇقىنىڭ بىئوتىنلاشتۇرۇلۇشىنى ئاساس قىلغانلىقى ئۈچۈن ، ئەگەر بۇ خىل ئۆزگىرىش ئەگەر لىزېن قالدۇقى ئۆز-ئارا تەسىرگە ئۇچرىسا ، باغلىنىشنىڭ ئالدىنى ئالالايدۇ.بۇنىڭدىن باشقا ، سېنزورغا سېلىشتۇرغاندا باغلىنىشنىڭ يۆنىلىشى ستېرېئولۇق توسالغۇ پەيدا قىلىدۇ ، شۇڭا قايتا ھاسىل بولىدىغان SPACA6 ، IZUMO1 ۋە JUNO ئېكتودومېنلىرىدىمۇ مۇنتىزىم تارتىش ئۇسۇللىرى ئېلىپ بېرىلدى.مۇشۇنداق بولۇشىغا قارىماي ، SPACA6 ئۇنىڭ بەلگە قويۇلغان IZUMO1 ياكى ئۇنىڭ بەلگىسى قويۇلغان JUNO (S14c ، d) بىلەن چۆكمىدى ، بۇ BLI تەجرىبىسىدە كۆرۈلگەن ئۆز-ئارا تەسىرنىڭ يوقلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.ئىجابىي كونترول بولۇش سۈپىتىمىز بىلەن ، JUNO نىڭ ئۇنىڭ IZUMO1 (S14e ۋە S15 رەسىملىرى) بەلگىسى قويۇلغان ئۆز-ئارا تەسىرنى جەزملەشتۈردۇق.
SPACA6 بىلەن IZUMO1 نىڭ قۇرۇلما ئوخشاشلىقىغا قارىماي ، SPACA6 نىڭ JUNO نى باغلىيالماسلىقى ھەيران قالارلىق ئەمەس.ئىنسانلارنىڭ IZUMO1 يۈزىدە JUNO بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدىغان 20 نەچچە قالدۇق بار ، بۇنىڭ ئىچىدە ئۈچ رايوننىڭ ھەر بىرىنىڭ قالدۇقلىرى بار (گەرچە كۆپىنچىسى ئېڭەك رايونىغا جايلاشقان) (S14f رەسىم).بۇ قالدۇقلارنىڭ ئىچىدە پەقەت SPACA6 (Glu70) دا ساقلانغان.نۇرغۇن قالدۇق ماددىلار ئەسلىدىكى بىئو-خىمىيىلىك خۇسۇسىيىتىنى ساقلاپ قالغان بولسىمۇ ، IZUMO1 دىكى مۇھىم Arg160 قالدۇقىنىڭ ئورنىنى SPACA6 دىكى سەلبىي زەرەتلەنگەن Asp148 ئالماشتۇردى.ئىلگىرىكى تەتقىقاتلاردا كۆرسىتىلىشىچە ، IZUMO1 دىكى Arg160Glu نىڭ ئۆزگىرىشى JUNO43 بىلەن بولغان باغلىنىشنى پۈتۈنلەي ئەمەلدىن قالدۇرىدۇ.بۇنىڭدىن باشقا ، IZUMO1 بىلەن SPACA6 نىڭ دائىرە يۆنىلىشىنىڭ پەرقى SPACA6 دىكى ئوخشاش رايوننىڭ JUNO باغلاش ئورنىنىڭ يەر يۈزىنى كۆرۈنەرلىك ئاشۇردى (S14g رەسىم).
گەرچە ئويۇننىڭ بىرىكىشى ئۈچۈن SPACA6 غا ئېھتىياجلىق ئىكەنلىكى ۋە ئۇنىڭ IZUMO1 بىلەن ئوخشىشىپ كېتىدىغانلىقىغا قارىماي ، SPACA6 بىلەن باراۋەر JUNO باغلاش ئىقتىدارى يوقتەك قىلىدۇ.شۇڭلاشقا ، بىز قۇرۇلما سانلىق مەلۇماتلىرىمىزنى تەدرىجى تەرەققىيات بىئولوگىيىسى تەمىنلىگەن مۇھىم پاكىتلار بىلەن بىرلەشتۈرۈشكە تىرىشتۇق.SPACA6 گومولوگىيىسىنىڭ تەرتىپكە سېلىنىشى سۈت ئەمگۈچىلەرنىڭ سىرتىدىكى ئورتاق قۇرۇلمىنىڭ ساقلانغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.مەسىلەن ، سىستايىن قالدۇقى ھەتتا مۇناسىۋەتلىك مۇناسىۋەتلىك سۇ مەھسۇلاتلىرىدىمۇ بار (6a رەسىم).ConSurf مۇلازىمېتىرىنى ئىشلىتىپ ، 66 تەرتىپتىكى كۆپ رەت تەرتىپنى ساقلاش ساقلاش سانلىق مەلۇماتلىرى SPACA6 يۈزىگە سىزىلغان.بۇ خىل ئانالىز ئاقسىلنىڭ تەدرىجىي تەرەققىي قىلىش جەريانىدا قايسى قالدۇق ماددىلارنىڭ ساقلانغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرەلەيدۇ ھەمدە قايسى يەر يۈزىنىڭ فۇنكسىيەدە رول ئوينايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرەلەيدۇ.
CLUSTAL OMEGA ئارقىلىق تەييارلانغان 12 خىل ئوخشىمىغان تۈردىكى SPACA6 ئېكتودومېننىڭ رەت تەرتىپى.ConSurf تەھلىلىگە قارىغاندا ، ئەڭ مۇتەئەسسىپ ئورۇنلار كۆك رەڭدە بەلگە قويۇلغان.سىستايىن قالدۇقى قىزىل رەڭدە گەۋدىلىنىدۇ.دائىرە چېگرىسى ۋە ئىككىلەمچى قۇرۇلما ئېلېمېنتلىرى توغرىلىنىشنىڭ ئۈستىدە كۆرسىتىلىدۇ ، بۇ يەردە ئوقلار β بەلۋاغ ۋە دولقۇن خىلىتنى كۆرسىتىدۇ.تەرتىپنى ئۆز ئىچىگە ئالغان NCBI زىيارەت پەرقلىگۈچىلەر: ئادەم (Homo sapiens, NP_001303901) ، ماندىرىل (ماندىرىلۇس ئاق قان كېسىلى ، XP_011821277) ، كاپۇچىن مايمۇنى (Cebus تەقلىدچىسى ، XP_017359366) ، ئات (Equus caballus, XP_02350610 34).) ، قويلار (Ovis aries, XP_014955560) ، پىل (Loxodonta africana, XP_010585293) ، ئىت (Canis lupus familyis, XP_025277208) ، چاشقان (Mus musculus, NP_001156381) ، Tasmanian ئىبلىس , 61_89 and Bullfrog (Bufo bufo, XP_040282113).نومۇر قويۇش ئىنسانلارنىڭ تەرتىپىنى ئاساس قىلىدۇ.b SPACA6 قۇرۇلمىسىنىڭ ئۈستۈنكى قىسمىدا 4HB ، ئاستى تەرىپى Ig غا ئوخشاش دائىرە ، ConSurf مۇلازىمېتىرىنىڭ قوغداش مۆلچەرىگە ئاساسەن رەڭلەر.ئەڭ ياخشى ساقلانغان قىسمى كۆك رەڭدە ، ئوتتۇراھال ساقلانغان قىسمى ئاق رەڭدە ، ئەڭ ئاز ساقلانغان قىسمى سېرىق رەڭدە.بىنەپشە رەڭلىك سىستېن.يۇقىرى دەرىجىدىكى قوغداشنى نامايان قىلىدىغان ئۈچ يۈز چاپلىقى 1 ، 2 ۋە 3 دېگەن بەلگە چاپلانغان قىستۇرمىلاردا كۆرسىتىلدى ، ئوڭ تەرەپ ئۈستىدىكى (ئوخشاش رەڭ لايىھىسى) 4HB كارتون.
SPACA6 قۇرۇلمىسىنىڭ يۇقىرى دەرىجىدە ساقلانغان ئۈچ يەر يۈزى بار (6b رەسىم).1-ياماق 4HB ۋە ئېڭەك رايونىنى ئۆز ئىچىگە ئالغان بولۇپ ، ساقلانغان ئىككى دانە CXXC گۈڭگۈرتسىز كۆۋرۈك ، Arg233-Glu132-Arg135-Ser144 ئۇلىنىش تورى (S7 رەسىم) ۋە ساقلانغان ئۈچ خىل خۇشپۇراق قالدۇق (Phe31 ، Tyr73 ، Phe137).Ig غا ئوخشاش دائىرە تېخىمۇ كەڭرى (رەسىم S6e) ، ئۇ ئىسپېرما يۈزىدىكى بىر قانچە مۇسبەت زەرەتلەنگەن قالدۇقلارغا ۋەكىللىك قىلىدۇ.قىزىقارلىق يېرى ، بۇ ياماقتا ئانتىتېلا ئېپتوپى بار بولۇپ ، ئىلگىرى SPACA6 30 ئىقتىدارىغا دەخلى قىلىدىغانلىقى كۆرسىتىلگەن.3-رايون ئىگگە ئوخشاش تورنىڭ ئېڭەك ۋە بىر تەرىپىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.بۇ رايوندا ساقلانغان پرولىن (Pro126 ، Pro127 ، Pro150 ، Pro154) ۋە سىرتقا يۈزلەنگەن قۇتۇپ / زەرەتلەنگەن قالدۇقلار بار.ئادەمنى ھەيران قالدۇرىدىغىنى ، 4HB يۈزىدىكى قالدۇق ماددىلارنىڭ كۆپىنچىسى ناھايىتى ئۆزگىرىشچان (6b رەسىم) ، گەرچە بۇ قاتلىنىش گەرچە SPACA6 گومولوگىيىسىدە ساقلانغان بولسىمۇ (گىدروپوبىك باغلانما يادرونىڭ مۇتەئەسسىپلىكى كۆرسىتىلگەندەك) ۋە IST ئادەتتىن تاشقىرى.
گەرچە بۇ SPACA6 دىكى ئەڭ كىچىك بايقىغىلى بولىدىغان ئىككىلەمچى قۇرۇلما ئېلېمېنتى ئەڭ كىچىك رايون بولسىمۇ ، ئەمما نۇرغۇن ئېڭەك رايونىنىڭ قالدۇقلىرى (3-رايوننى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ) SPACA6 گومولوگىيىسى ئارىسىدا ناھايىتى يۇقىرى ساقلانغان ، بۇ بەلكىم ھېلىلىق باغلانما ۋە ساندۋىچنىڭ يۆنىلىشىنىڭ رولىنى ئوينايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.مۇتەئەسسىپ.قانداقلا بولمىسۇن ، SPACA6 ۋە IZUMO1 نىڭ يانتۇ رايونىدا كەڭ كۆلەمدە ھىدروگېن باغلىنىشى ۋە ئېلېكتر سىتاتىك تورى بولسىمۇ ، IZUMO137,43,44 نىڭ كۆپ خىل رۇخسەت قىلىنغان قۇرۇلمىلىرىنىڭ ماسلىشىشىدا ئىچكى جانلىقلىقنىڭ ئىسپاتىنى كۆرگىلى بولىدۇ.يەككە تور دائىرىلىرىنىڭ توغرىلىنىشى ياخشى قاپلانغان ، ئەمما تور دائىرىلىرىنىڭ بىر-بىرىگە سېلىشتۇرغاندا يۆنىلىشى مەركىزى ئوقتىن ° C 50 تىن ° C 70 گىچە بولغان (S16 رەسىم).SPACA6 نىڭ ھەل قىلىش چارىسىنىڭ ماسلىشىشچانلىقىنى چۈشىنىش ئۈچۈن ، SAXS تەجرىبىسى ئېلىپ بېرىلدى (S17a ، b).SPACA6 ئېكتودومېننىڭ Ab initio نى قايتا قۇرۇش تاياقچە خرۇستال قۇرۇلمىغا ماس كەلگەن (S18 رەسىم) ، گەرچە كراتكىي پىلانىدا مەلۇم دەرىجىدە ئەۋرىشىملىكى كۆرسىتىلگەن (S17b رەسىم).بۇ خىل ئۆزگىرىش IZUMO1 بىلەن سېلىشتۇرما بولۇپ ، باغلانمىغان ئاقسىل رېشاتكىدا ھەم ئېرىتمىسىدە بۇمېراڭ شەكلىنى ئالىدۇ.
ئەۋرىشىم رايوننى ئېنىق پەرقلەندۈرۈش ئۈچۈن ، SPACA6 دە ھىدروگېن-دېئېرتسىيىلىك ئالماشتۇرۇش سپېكتروسكوپى (H-DXMS) ئېلىپ بېرىلىپ ، ئىلگىرى IZUMO143 دا ئېرىشكەن سانلىق مەلۇماتلار بىلەن سېلىشتۇرۇلدى (7a ، b).SPACA6 ئېنىقلا IZUMO1 غا قارىغاندا تېخىمۇ جانلىق بولۇپ ، 100،000 s ئالماشتۇرۇلغاندىن كېيىن پۈتكۈل قۇرۇلمىدا تېخىمۇ يۇقىرى تاشقى پېرېۋوت ئالماشتۇرۇش ئارقىلىق كۆرسىتىلگەن.ھەر ئىككى قۇرۇلمىدا ، ئايلانما رايوننىڭ C تېرمىنال قىسمى يۇقىرى دەرىجىدىكى ئالماشتۇرۇشنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ ، بۇ بەلكىم 4HB ۋە Ig غا ئوخشاش تور دائىرىلىرىنىڭ ئۆز-ئارا مۇناسىۋەتلىك چەكلىك ئايلىنىشىغا يول قويىدۇ.قىزىقارلىق يېرى ، 147CDLPLDCP154 قالدۇقىدىن تەركىب تاپقان SPACA6 ئېغىزىنىڭ C تېرمىنال قىسمى ناھايىتى قوغدىلىدىغان رايون 3 (رەسىم 6b) ، بۇ بەلكىم ئارىلىقتىكى جانلىقلىقنىڭ SPACA6 نىڭ تەدرىجىي ساقلانغان ئالاھىدىلىكى ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.جانلىقلىق ئانالىزىغا ئاساسلانغاندا ، CD ئىسسىقلىق ئېرىتىش سانلىق مەلۇماتلىرىدا كۆرسىتىلىشىچە ، SPACA6 (Tm = 51.2 ° C) IZUMO1 (Tm = 62.9 ° C) دىن تۆۋەن مۇقىم (S1e ۋە S19).
SPACA6 ۋە b IZUMO1 نىڭ H-DXMS رەسىملىرى.ئۆسۈم نىسبىتىنى ئالماشتۇرۇش بەلگىلەنگەن ۋاقىت نۇقتىسىدا بېكىتىلدى.ھىدروگېن-دېئېرتسىي ئالماشتۇرۇشنىڭ دەرىجىسى كۆك (% 10) دىن قىزىل (% 90) گىچە تەدرىجىي ئۆلچەمدە كۆرسىتىلىدۇ.قارا قۇتىلار يۇقىرى ئالماشتۇرۇش رايونىغا ۋەكىللىك قىلىدۇ.خىرۇستال قۇرۇلمىدا كۆزىتىلگەن 4HB ، hinge ۋە Ig غا ئوخشاش دائىرىنىڭ چېگراسى دەسلەپكى تەرتىپنىڭ ئۈستىدە كۆرسىتىلدى.10 s ، 1000 s ۋە 100،000 s دىكى Deuterium ئالماشتۇرۇش سەۋىيىسى SPACA6 ۋە IZUMO1 نىڭ سۈزۈك مولېكۇلا يۈزىنىڭ ئۈستىگە قويۇلغان بەلۋاغ جەدۋىلىگە پىلانلانغان.تاشقى پېرېۋوت ئالماشتۇرۇش نىسبىتى% 50 تىن تۆۋەن قۇرۇلمىلارنىڭ بىر قىسمى ئاق رەڭدە.% 50 تىن يۇقىرى H-DXMS ئالماشتۇرۇش دائىرىسى تەدرىجىي رەڭدە بولىدۇ.
CRISPR / Cas9 ۋە چاشقان گېنى چەكلەش گېن ئىستراتېگىيىسىنىڭ قوللىنىلىشى ئىسپېرما ۋە تۇخۇمنىڭ باغلىنىشى ۋە بىرىكىشىدە مۇھىم بولغان بىر قانچە ئامىلنىڭ ئېنىقلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقاردى.IZUMO1-JUNO ۋە CD9 قۇرۇلمىسىنىڭ ياخشى خاراكتېرگە ئىگە ئۆز-ئارا تەسىر قىلىشىدىن باشقا ، ئويۇننىڭ بىرىكىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئاقسىللارنىڭ كۆپىنچىسى قۇرۇلما ۋە ئىقتىدار جەھەتتە جانلىق.SPACA6 نىڭ بىئوفىزىكىلىق ۋە قۇرۇلما ئالاھىدىلىكى ئوغۇتلاش جەريانىدا يېپىشتۇرۇش / بىرىكتۈرۈش مولېكۇلا تېپىشمىسىنىڭ يەنە بىر قىسمى.
SPACA6 ۋە IST نىڭ باشقا ئەزالىرى سۈت ئەمگۈچىلەر ۋە يەككە قۇشلار ، ئۆمىلىگۈچى ھايۋانلار ۋە سۇغارغۇچىلاردا ناھايىتى ساقلانغاندەك قىلىدۇ.ئەمەلىيەتتە ، SPACA6 ھەتتا zebrafish نىڭ ئوغۇتلىنىشى ئۈچۈنمۇ تەلەپ قىلىنىدۇ دەپ قارىلىدۇ. بۇ تەقسىمات DCST134 ، DCST234 ، FIMP31 ۋە SOF132 قاتارلىق باشقا داڭلىق ئويۇنلار بىرىكىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئاقسىللارغا ئوخشايدۇ ، بۇ ئامىللارنىڭ HAP2 كەمچىل ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. GCS1 دەپ ئاتىلىدۇ) نۇرغۇنلىغان نامايىشچىلارنىڭ كاتالىزاتورلۇق پائالىيىتىگە مەسئۇل ئاقسىل.، ئۆسۈملۈك ۋە بوغۇم ئاغرىقى.ئوغۇتلانغان بىرىكتۈرۈلگەن ئاقسىل 60 ، 61. گەرچە SPACA6 بىلەن IZUMO1 ئوتتۇرىسىدا قۇرۇلما ئوخشاشلىقى كۈچلۈك بولسىمۇ ، ئەمما بۇ ئاقسىللارنىڭ ھېچقايسىسىنى كودلاشتۇرىدىغان گېننىڭ ئۇرۇلۇشى ئەر چاشقانلاردا تۇغماسلىقنى كەلتۈرۈپ چىقاردى ، بۇ ئۇلارنىڭ ئويۇن ئويناشتىكى رولى كۆپەيتىلمىگەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ..تېخىمۇ كەڭ مەنىدىن ئېيتقاندا ، بىرىكىشنىڭ يېپىشتۇرۇش باسقۇچىغا ئېھتىياجلىق بولغان ئىسپېرما ئاقسىلىنىڭ ھېچقايسىسى ئارتۇقچە ئەمەس.
SPACA6 (ۋە IST دەرىجىدىن تاشقىرى ئائىلىنىڭ باشقا ئەزالىرى) ئۆز-ئارا تۇتاشتۇرۇشقا قاتناشقان-قاتناشمىغانلىقى ، ئۆز ئارا تور ھاسىل قىلىپ ، مۇھىم ئاقسىللارنى بىرىكتۈرۈش نۇقتىسىغا قوبۇل قىلىدىغانلىقى ، ھەتتا ئاسان تەسكە توختايدىغان فوگېنلىق رولىنى ئوينايدىغانلىقى يەنىلا ئوچۇق سوئال بولۇپ قالدى.HEK293T ھۈجەيرىسىدىكى ئورتاق ئىممۇنىتېتقا قارشى تۇرۇش تەتقىقاتى تولۇق ئۇزۇنلۇقتىكى IZUMO1 بىلەن SPACA632 ئوتتۇرىسىدىكى ئۆز-ئارا تەسىرنى ئاشكارىلىدى.قانداقلا بولمىسۇن ، بىزنىڭ قايتا ھاسىل قىلىدىغان ئېكتودومىنلىرىمىز ۋىرۇستا ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتەلمىدى ، بۇ نودا قاتارلىقلاردا كۆرۈلىدىغان ئۆز-ئارا تەسىرنى كۆرسىتىدۇ.ھەر ئىككىسى قۇرۇلۇشتا ئۆچۈرۈۋېتىلدى (ئوغۇتلاشنىڭ ھاجىتى يوق IZUMO1 نىڭ سىپوپلازما قۇيرۇقىغا دىققەت قىلىڭ).ئۇنىڭدىن باشقا ، IZUMO1 ۋە / ياكى SPACA6 بەلكىم بىز ۋىرۇستا كۆپەيتەلمەيدىغان ئالاھىدە باغلىنىش مۇھىتىنى تەلەپ قىلىشى مۇمكىن ، مەسىلەن فىزىئولوگىيىلىك كونكرېت ماسلىشىش ياكى باشقا ئاقسىل بار مولېكۇلا مۇرەككەپ ماددىلار (تېخى بايقالمىغان ياكى تېخى بايقالمىغان).گەرچە IZUMO1 ئېكتودومېن ئىسپېرما توپىنىڭ تۇخۇمغا تۇتىشىدىغان بوشلۇقتىكى باغلىنىشىنى ۋاسىتە قىلغان دەپ قارالسىمۇ ، ئەمما SPACA6 ئېكتودومېننىڭ مەقسىتى ئېنىق ئەمەس.
SPACA6 نىڭ قۇرۇلمىسى ئاقسىل بىلەن ئاقسىلنىڭ ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىشى مۇمكىن بولغان بىر قانچە ساقلانغان يۈزلەرنى ئاشكارىلىدى.ئاسما رايوننىڭ ساقلانغان قىسمى دەرھال CXXC موتىف بىلەن قوشنا (يۇقىرىدىكى 1-نومۇرلۇق ياماق) نىڭ سىرتقى يۈزىگە قارىتىلغان بىر نەچچە خىل خۇشپۇراق قالدۇقلىرى بار ، بۇلار كۆپىنچە بىئولوگىيىلىك ماددىلار بىلەن گىدروپوبىك ۋە π تىزىش ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدۇ.Ig غا ئوخشاش دائىرە (2-رايون) نىڭ كەڭ تەرەپلىرى ناھايىتى ياخشى ساقلانغان Arg ۋە ئۇنىڭ قالدۇقلىرى بىلەن مۇسبەت زەرەتلەنگەن ئۆستەڭ ھاسىل قىلىدۇ ، بۇ رايونغا قارشى ئانتىتېلا ئىلگىرى ئويۇننىڭ بىرىكىشىنى توسۇش ئۈچۈن ئىشلىتىلگەن.ئانتىتېلا 212RIRPAQLTHRGTFS225 تۈز سىزىقلىق ئېپتوپنى تونۇيدۇ ، بۇ ئالتە خىل ئارگىنېن قالدۇقىنىڭ ئۈچى بار ھەمدە ناھايىتى يۇقىرى ساقلانغان His220.بۇ نورمالسىزلىقنىڭ بۇ ئالاھىدە قالدۇقلارنىڭ ياكى پۈتكۈل رايوننىڭ توسۇلۇشىدىن كېلىپ چىققانلىقى ئېنىق ئەمەس.بۇ بوشلۇقنىڭ ساندۋىچنىڭ C تېرمىنالىغا يېقىن ئورنى قوشنا ئىسپېرما ئاقسىلى بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدۇ ، ئەمما تۇخۇم ئاقسىلى بىلەن ئەمەس.ئۇندىن باشقا ، ئەۋرىشىم ئىچىدە يۇقىرى ئەۋرىشىم مول پرولىن مول بولغان ساڭگىلاپ قېلىش (3-بېكەت) ئاقسىل بىلەن ئاقسىل ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدىغان ئورۇن بولۇشى مۇمكىن ، ياكى بۇ ئىككى ساھە ئوتتۇرىسىدىكى جانلىقلىقنىڭ ساقلانغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.SPACA6 نىڭ نامەلۇم رولى ئۈچۈن جىنس مۇھىم.ئويۇنلارنىڭ بىرىكىشى.
SPACA6 ھۈجەيرە ئارا يېپىشقاق ئاقسىلنىڭ خۇسۇسىيىتىگە ئىگە ، بۇلار Ig غا ئوخشاش ساندۋىچ قاتارلىقلارنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.نۇرغۇنلىغان يېپىشقاق ئاقسىللار (مەسىلەن ، كادىرىن ، بىرىكتۈرگۈچى ، يېپىشقاق ۋە IZUMO1) بىر ياكى بىر قانچە ساندۋىچ ساھەسىگە ئىگە بولۇپ ، ئاقسىل ھۈجەيرە پەردىسىدىن ئاقسىلنى مۇھىت نىشانىغا يەتكۈزىدۇ.SPACA6 نىڭ Ig غا ئوخشايدىغان دائىرە يەنە يېپىشتۇرۇش ۋە ئۇيۇشۇشنىڭ sand ساندۋىچلىرىدا كۆپ ئۇچرايدىغان موتىفنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ: β ساندىۋىچنىڭ ئۇچىدىكى پاراللېل تالنىڭ قوش ھەسسىسى ، مېخانىكىلىق قىسقۇچ دەپ ئاتىلىدۇ 66.بۇ نەقىش قىرقىش كۈچىگە قارشى تۇرۇش كۈچىنى ئاشۇرىدۇ دەپ قارىلىدۇ ، بۇ ئاقسىللار ئارا ئۆز-ئارا تەسىرگە قاتناشقان ئاقسىل ئۈچۈن قىممەتلىك.قانداقلا بولمىسۇن ، يېپىشقاققا ئوخشىشىپ كېتىدىغانلىقىغا قارىماي ، ھازىر SPACA6 نىڭ تۇخۇم ئېقى بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدىغانلىقىغا ئائىت ھېچقانداق پاكىت يوق.SPACA6 ectodomain JUNO غا باغلىنالمايدۇ ، SPACA6 ئىپادىلەيدىغان HEK293T ھۈجەيرىلىرى بۇ يەردە كۆرسىتىلگەندەك ، 32-رايون كەمچىل بولغان تۇخۇم ھۈجەيرىسى بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتەلمەيدۇ.ئەگەر SPACA6 ئۆز-ئارا باغلىنىشلىق مۇناسىۋەت ئورناتسا ، بۇ ئۆز-ئارا تەسىرلەر تەرجىمىدىن كېيىنكى ئۆزگەرتىش ياكى باشقا ئىسپېرما ئاقسىلىنىڭ مۇقىملىشىشىنى تەلەپ قىلىشى مۇمكىن.كېيىنكى پەرەزنى قوللاش ئۈچۈن ، IZUMO1 كەمتۈك ئىسپېرما ئۆسمىسى تۇخۇم ھۈجەيرىسىگە باغلىنىپ ، IZUMO1 دىن باشقا مولېكۇلالارنىڭ ئويۇننىڭ يېپىشتۇرۇش 27-قەۋىتىگە قاتناشقانلىقىنى كۆرسەتتى.
نۇرغۇنلىغان ۋىرۇسلۇق ، ھۈجەيرە ۋە تەرەققىي قىلغان بىرىكتۈرۈش ئاقسىلىنىڭ فۇنكىسىيەلىك رولىنى ئالدىن پەرەز قىلىدىغان خۇسۇسىيەتكە ئىگە.مەسىلەن ، ۋىرۇسنىڭ بىرىكىشى گلىكوپروتىن (I ، II ۋە III تۈرلەر) ساھىبجامال پەردىسىگە كىرگۈزۈلگەن ئاقسىلنىڭ ئاخىرىدا گىدروپوبىك بىرىكتۈرۈش پېپتىد ياكى ئايلانما بولىدۇ.IZUMO143 نىڭ گىدروفىلىتلىق خەرىتىسى ۋە IST ئادەتتىن تاشقىرى ئائىلىنىڭ قۇرۇلمىسى (بېكىتىلگەن ۋە ئالدىن پەرەز قىلىنغان) ھېچقانداق گىدروپوبىك بىرىكتۈرۈش پېپتىدنى كۆرسەتمىگەن.شۇڭا ، ئەگەر IST ئادەتتىن تاشقىرى ئائىلىدىكى ئاقسىل فوسوگېن رولىنى ئوينايدىغان بولسا ، ئۇلار باشقا بىلىنگەن مىساللارغا ئوخشىمايدىغان ئۇسۇلدا قىلىدۇ.
خۇلاسىلىگەندە ، IST ئەزالىرىنىڭ ئويۇننىڭ بىرىكىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئاقسىللارنىڭ ئادەتتىن تاشقىرى ئىقتىدارى يەنىلا كىشىنى ھەيران قالدۇرىدىغان سىر بولۇپ كەلمەكتە.بىزنىڭ ئالاھىدىلىككە ئىگە SPACA6 قايتا ھاسىل بولىدىغان مولېكۇلامىز ۋە ئۇنىڭ ھەل قىلىنغان قۇرۇلمىسى بۇ ئورتاق قۇرۇلمىلارنىڭ مۇناسىۋىتى ۋە ئۇلارنىڭ ئويۇن ئويناش ۋە بىرىكىشتىكى رولى ھەققىدە چۈشەنچە بېرىدۇ.
مۆلچەرلەنگەن ئىنسانلارنىڭ SPACA6 ئېكتودومېن (NCBI نىڭ قوشۇلۇش نومۇرى NP_001303901.1 ؛ قالدۇقلىرى 27-2246) غا ماس كېلىدىغان DNA تەرتىپى Drosophila melanogaster S2 ھۈجەيرىسىدە ئىپادىلەش ئۈچۈن كودلاشتۇرۇلغان بولۇپ ، كوزاك (Eurofins Genomics) بىلەن كودلاشتۇرۇلغان.، BiP ئاجرىتىپ چىقىرىش سىگنالى ۋە ماس كېلىدىغان 5 ′ ۋە 3 ′ بۇ گېننىڭ پورومىيسىن (pMT-puro) بىلەن تاللانغان مېتاللوتونىئون تەشۋىقاتچىسى ئاساسىدا ياسالغان بۇ خىل گېننىڭ pMT ئىپادىلەش ۋېكتورىغا ئايلىنىدۇ.PMT-puro ۋېكتورى 10x-His C تېرمىنالى بەلگىسى قويۇلغاندىن كېيىن ، قان تومۇرنى تازىلاش تور بېتىنى كودلايدۇ (S2 رەسىم).
SPACA6 pMT-puro ۋېكتورىنىڭ D. melanogaster S2 (Gibco) ھۈجەيرىسىگە مۇقىم يۆتكىلىشى IZUMO1 ۋە JUNO43 ئۈچۈن ئىشلىتىلگەن كېلىشىمگە ئوخشاش ئېلىپ بېرىلدى.شنايدېرنىڭ ئوتتۇرا (Gibco) دا S2 ھۈجەيرىسى ئېرىتىلگەن ۋە ئۆستۈرۈلگەن بولۇپ ، ئەڭ ئاخىرقى قويۇقلۇقى% 10 (v / v) ئىسسىقلىق قوزغىتىلمىغان ھامىلىنىڭ موزاي قان زەردابى (Gibco) ۋە 1X ئانتىتېلاتىك ئانتىبىئوتىك (Gibco) بىلەن تولۇقلانغان.دەسلەپكى ئۆتۈشمە ھۈجەيرىلەر (3.0 x 106 ھۈجەيرە) 6 قۇدۇق تاختىسىنىڭ ئايرىم قۇدۇقلىرىغا (Corning) چاپلانغان.27 سېلسىيە گرادۇسلۇق 24 سائەت يوشۇرۇنغاندىن كېيىن ، ئىشلەپچىقارغۇچىلارنىڭ كېلىشىمنامىسىگە ئاساسەن ، SPACA6 pMT-puro ۋېكتورى ۋە ئېففېنىت ئالماشتۇرۇش رېئاكتورى (Qiagen) نىڭ ئارىلاشمىسى بىلەن ھۈجەيرىلەر ئالماشتۇرۇلدى.يۆتكەلگەن ھۈجەيرىلەر 72 سائەت سىلىندى ، ئاندىن 6 مىللىگىرام / مىللىلېتىر پۇرومىنسىن بىلەن يىغىۋېلىندى.ھۈجەيرىلەر ئاندىن تولۇق Schneider نىڭ ۋاستىسىدىن ئايرىۋېتىلىپ ، چوڭ تىپتىكى ئاقسىل ئىشلەپچىقىرىش ئۈچۈن قان زەردابىسىز ھاشارات- XPRESS ۋاستىسى (Lonza) غا قويۇلدى.1 L تۈركۈمدىكى S2 ھۈجەيرە مەدەنىيىتى 2 L شامالدۇرغۇچلۇق تەكشى ئاستى پولىپروپىلېن ئېرلېنمېيېر پلاستىنكىسىدىكى 8-10 × 106 مىللىمېتىر -1 ھۈجەيرىگە ئۆستۈرۈلۈپ ، ئەڭ ئاخىرقى قويۇقلۇقى 500 µM CuSO4 (Millipore Sigma) بىلەن مىكروبسىزلاندۇرۇلدى.قوزغىتىلدى.قوزغالغان مەدەنىيەتلەر كەچ سائەت 120 دە 27 سېلسىيە گرادۇستا تۆت كۈن سىڭدۈرۈلدى.
SPACA6 نى ئۆز ئىچىگە ئالغان شەرتلىك ۋاسىتە 5 سېلسىيە گرادۇسلۇق 5660 × گرامدا مەركەزدىن قاچۇرۇش ئارقىلىق ئايرىۋېتىلدى ، ئۇنىڭدىن كېيىن 10 kDa MWCO پەردىسى بار Centramate شەكىللىك ئېقىن سۈزۈش سىستېمىسى (Pall Corp).تەركىبىدە SPACA6 بولغان قويۇقلاندۇرۇلغان ۋاسىتىنى 2 مىللىمېتىر Ni-NTA ئاگاروزا قالدۇقى (Qiagen) ستونغا ئىشلىتىڭ.Ni-NTA قالدۇقلىرى 10 بۇففېر (CV) بۇففېر A بىلەن يۇيۇلدى ، ئاندىن 1 CV بۇففېر A قوشۇلدى ، ئەڭ ئاخىرقى imidazole قويۇقلۇقى 50 mM.SPACA6 غا 10 مىللىمېتىرلىق بۇففېر ئېرىتىلگەن بولۇپ ، imidazole تولۇقلاپ ، ئەڭ ئاخىرقى قويۇقلۇقى 500 مىللىمېتىر.چەكلەش سىنىپى ترومبىن (Millipore Sigma) دىئالىزلاش ئۈچۈن ھەر بىر mg SPACA6 بىلەن 1 L 10 mM Tris-HCl ، pH 7.5 ۋە 150 mM NaCl (بۇففېر B) دىئالىز نەيچىسى (MWCO 12-14 kDa) غا بىۋاسىتە قوشۇلدى.) 4 سېلسىيە گرادۇستا 48 سائەت.ئاندىن كېيىن ترومبىندىن ياسالغان SPACA6 ئۈچ ھەسسە سۇيۇلدۇرۇلۇپ ، تۇزنىڭ قويۇقلۇقى تۆۋەنلەپ ، 1 مىللىمېتىر MonoS 5/50 GL كاتەكچە ئالماشتۇرۇش تۈۋرۈكىگە (Cytiva / GE) قاچىلانغان بولۇپ ، 10MM Tris-HCl ، pH 7.5.كاتەك ئالماشتۇرغۇچ 3 OK 10 mM Tris-HCl ، pH 7.5 بىلەن يۇيۇلدى ، ئاندىن SPACA6 10 مىللىمېتىرلىق Tris-HCl دىكى 0 دىن 500 مىللىمېتىرغىچە بولغان سىزىقلىق گرادېنت بىلەن يۇقىرى كۆتۈرۈلدى ، pH 7.5 بولسا 25 OK.ئىئون ئالماشتۇرۇش خروموگرافىيىسىدىن كېيىن ، SPACA6 قويۇقلۇقى 1 مىللىمېتىرغا مەركەزلەشتۈرۈلۈپ ، ENF SEC650 10 x 300 تۈۋرۈكى (BioRad) دىن بۇففېر B بىلەن تەڭلەشتۈرۈلدى.ساپلىق% 16 SDS- پولىئاكرىلامىد گېلىدا Coomassie داغلانغان ئېلېكتروفورېز تەرىپىدىن كونترول قىلىنغان.ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقى پىۋا-لامبېرت قانۇنى ۋە نەزەرىيىۋى قۇتۇپ يوقىتىش كوئېففىتسېنتى ئارقىلىق 280 nm سۈمۈرۈلۈش ئارقىلىق مىقدارلاشقان.
ساپلاشتۇرۇلغان SPACA6 بىر كېچىدىلا 10 mM ناترىي فوسفات ، pH 7.4 ۋە 150 mM NaF غا قارشى دىئالىزلانغان ۋە CD سپېكتروسكوپ ئارقىلىق ئانالىز قىلىنىشتىن ئىلگىرى 0.16 mg / mL غا سۇيۇلدۇرۇلغان.دولقۇن ئۇزۇنلۇقى 185 دىن 260 nm بولغان CD لارنىڭ سپېكترالىق سىكانىرلاش Jasco J-1500 سپېكتروپولومېتىردا 1 مىللىمېتىر ئوپتىكىلىق يولنىڭ ئۇزۇنلۇقى (Helma) 25 سېلسىيە گرادۇسلۇق مىنۇتىغا 50 سېلسىيە گرادۇسلۇق كۋارتس كۇۋەيت ئارقىلىق يىغىۋېلىندى.CD سپېكترى ئاساسىي جەھەتتىن تۈزىتىلدى ، ئوتتۇرا ھېساب بىلەن 10 قېتىمدىن ئارتۇق سېتىۋېلىندى ۋە cm2 / dmol گرادۇسلۇق قالدۇق ئېللىپتىكلىق (θMRE) غا ئۆزگەرتىلدى:
بۇ يەردىكى MW بولسا Da دىكى ھەر بىر ئەۋرىشكىنىڭ مولېكۇلا ئېغىرلىقى.N بولسا ئامىنو كىسلاتاسىنىڭ سانى.mill مىللىگىردىكى ئېللىپتىكلىق ؛d cm دىكى ئوپتىكىلىق يولنىڭ ئۇزۇنلۇقىغا ماس كېلىدۇ.بىرلىكتىكى ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقى.